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两种泥鳅中PdSox8和PdSox9的RFLP分析 |
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常重杰 周荣家 余其兴
摘 要：以α-32P-dCTP标记的大鳞副泥鳅的PdSox8和PdSox9基因片段为探针，研究了二者在泥鳅和大鳞副泥鳅中的限制性片段长度多态性。结果表明两种探针在6尾大鳞副泥鳅（3♀3 ♂）和6尾泥鳅（3♀3 ♂）的经EcoRI和HindIII完全酶切的基因组DNA中检测到了较丰富的阳性杂交带，并讨论了其产生的可能原因。未发现性特异杂交带。
关键词：泥鳅；大鳞副泥鳅；RFLP
分类号：Q38 文献标识码：A
文章编号：0253－9772(2000)03－0153－04
The RFLP Analysis of PdSox8 and PdSox9 in
Two Species of Loaches
CHANG Zhong-jie， ZHOU Rong-jia， YU Qi-xing
(College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan city, 430072，China)
Abstract：With the α-32 P-dCTP-labeled PdSox8 and PdSox9 fragments of Paramisgurnus dabryanus as probes, the Restricted Fragment Length Polymorphism(RFLP) were analyzed in two species of loaches P. dabryanus and Misgurnus anguillicaudatus. The results showed that the plentiful positive bands were observed in the genomic DNA of 6 individuals(3♀3♂) of P. dabryanus and 6 individuals(3♀3♂) M.anguillicaudatus, which were digested thoroughly by EcoRI and HindIII. The possible reasons were discussed. No sex-specific band was observed.
Key words：Paramisgurnus dabryanus; Misgurnus anguillicaudatus; RFLP
人及哺乳类睾丸的发育和分化取决于Y染色体的有无。人类的性别决定基因定位于Y染色体上临近拟常染色体区边界的一35kb的区域内〔1〕。SRY（sex related Y gene）是该区域唯一的基因，已经证明它编码睾丸决定因子TDF(tests determining factor)。SRY基因编码的蛋白质中含有一长79个氨基酸残基的保守区，称为HMG－box，该保守区可以和DNA进行序列特异性结合。已经在哺乳类和非哺乳类中发现了一些在该保守区与SRY具有较高序列相似性的基因，它们被命名为Sox（SRY box）基因。Sox基因是一个在HMG－box区域与SRY－box具有60％以上相似性的基因家族〔2〕。它们在胚胎发育和性别决定过程中起着重要作用。
鱼类约占脊椎动物种数的一半，作为较低等的脊椎动物，是从水生到陆生进化上的一个重要环节。在鱼类中存在从雌雄同体到雌雄异体的各种性别类型。性反转在鱼类也是较为常见的现象。因此，在鱼类中开展Sox基因的研究将会大大促进性别决定及其进化机制的研究〔3〕。我们曾利用兼并引物PCR方法在大鳞副泥鳅中克隆了PdSox8和PdSox9（Genbank接受号分别为AF116249和AF116250）两个基因片段，本文研究了这两个基因在两种泥鳅中的限制性酶切片段长度多态性分布。
1 材料与方法
1.1 材 料
实验用鱼购自武汉市农贸市场。探针为本实验室克隆的大鳞副泥鳅PdSox8（长521bp）和PdSox9（长530bp）基因片段，经放射性同位素标记而成。RNA酶,HindIII,EcoRI等系华美公司产品，DNA探针随机引物标记试剂盒为Gibco产品，购自武汉卫检公司。
1.2 方 法
1.2.1 基因组DNA的制备
取0.1～0.5ml血液，加入1/6体积ACD抗凝，3 000r/min离心10min，以[1] [2] 下一页
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