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苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质p21CIP1蛋白表达的调节及其机制 |
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sion was also increased. Administration of benazepril for one week could significantly suppress kidney hypertrophy and ACE activities were reduced by 89.0%, 70.0% and 70.5% in plasma and renal cortex and medulla, respectively. Expressions of TGFβ1 mRNA, TGFβ1 and p21CIP1 protein were decreased by 47.7%, 49.5% and 60.0%, respectively. Conclusion Benazepril may suppress increased p21CIP1 protein expression in diabetic rats and its mechanism may partially be related to down-regulation of TGFβ1 expression.
【Key words】 Benazepril Diabetic nephropathy p21CIP1 protein Transforming growth factor β1
血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对糖尿病肾病(DN)的保护作用已为大量的临床和实验所证实，其机制除血流动力学效应外，更重要的是对肾脏肥大的抑制作用。然而，ACEI对糖尿病肾脏肥大抑制作用机制目前尚未完全了解。近年来研究表明糖尿病肾脏肥大受许多细胞因子特别是转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)调节，而这些生长因子又是通过调控细胞周期起作用，p21CIP1蛋白是一种重要的细胞周期蛋白激酶抑制剂(cyclin kinase inhibitor, CKI)，研究表明TGFβ1的部分作用是通过p21CIP1蛋白介导〔1〕。因而，甚有必要了解ACEI是否是通过调节p21CIP1蛋白表达而抑制肾脏肥大。为此，本研究选用一种对肾组织高度亲和力的ACE抑制剂苯那普利，探讨它对糖尿病大鼠肾皮质p21CIP1表达的影响及其机制。
材料和方法
一、糖尿病模型建立及动物分组
所有大鼠均接受右侧肾切除术，2周后除6只作对照外，其余均腹腔注射单剂量链脲佐菌素(STZ)60mg/kg(溶解在10mmol/L枸椽酸缓冲液中，pH 5.5)，对照组仅注射等量枸椽酸缓冲液，48～72小时后尾静脉采血，用血糖仪One Touch Ⅱ型〔强生(中国)有限公司〕测定全血血糖，血糖≥16.7 mmol/L，同时尿糖在～以上者确定为糖尿病模型。动物分三组：(1)单侧肾切除对照组(C组，6只)；(2)糖尿病组(D组，7只)；(3)糖尿病苯那普利治疗组(DB组，7只)。苯那普利10mg.kg-1.d-1灌胃，C与D组仅给予等量生理盐水灌胃。观察一周后收集标本。
二、标本收集
一周末大鼠在空腹16小时后尾静脉采血待测血糖及血胰岛素水平。然后在3%水合氯醛麻醉下行右侧颈总动脉插管接血压监测仪(XY-1型，长江测试技术服务公司制造)记录平均动脉压(MAP)并收集血标本，取血浆保存于-70℃冰箱中待测ACE活性，同时收集血清待测血肌酐；肾脏在腹主动脉插管后注入4℃预冷的生理盐水反复灌洗后，称重、分离皮、髓质，保存于-70℃冰箱中待测肾组织ACE活性及总RNA和蛋白提取。血糖、血肌酐水平由日立7150型全自动生化分析仪测得；血胰岛素用放射免疫法测定。
三、血浆及肾皮、髓质ACE活性测定
参考Unger〔2〕等方法略加改进，由日立F-4000荧光分光光度计测得(EX360nm、EW486nm)。所需底物马尿酰-组氨酰-亮氨酸(Hippury-L-histidyl-L-leucine, Hip-his-leu)、荧光激发物邻苯二醛(Ophthadialdehyde)及标准品组氨酰-亮氨酸(His-leu, HL)均购自Sigma公司。酶活性单位表示为nmol HL.min-1.ml-1(血浆)或nmol HL.min-1.mg-1(组织)。
四、Northern杂交检测肾皮质TGFβ1 mRNA表达
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