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碱性成纤维细胞生长因子对血管平滑肌细胞及内膜损伤后血管 及 型胶原mRNA表达的影响 |
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ha;1［Ⅲ］mRNA levels in cultured SMCs.
Administration of bFGF (40μg/d) caused a significant increase of α1［Ⅰ］，α1［Ⅲ］ procollagen
mRNA expression of vessel wall after balloon injury. The vascular collagen content was also increased.
The effect of bFGF was significantly decreased by bFGF antibody. Conclusion The results of this study
support that bFGF is an important factor in controlling collagen metabolism of vascular smooth muscle cells
and the vessel wall after balloon injury. It may play a significant role in vessel remodeling after balloon injury.
【Key words】 fibroblast growth factor, basic collagen blood vessels
血管介入损伤后再狭窄(RS)成为影响血管成形术疗效的最大障碍。血管再狭窄机
制与血管损伤后弹性回缩、血栓形成、新生内膜形成以及胶原等基质参与的血管重塑
有关［1，2］。上述病理变化是多种生长因子共同参与作用的结果。已往对成纤维细胞
生长因子(FGF)的认识局限于与成纤维细胞关联的作用。现已证实，FGF是强烈的促细
胞分裂因子，在血管损伤后平滑肌细胞增殖及向内膜迁移起着重要作用［3，4］。本研
究主要观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对平滑肌细胞及损伤后血管Ⅰ型及Ⅲ型胶
原mRNA的影响。
材料与方法
1.细胞培养、细胞总RNA的制备与鉴定：断头处死大鼠，立即在无菌操作下取出主
动脉，分离血管中膜并剪成0.1～0.3mm2小块放于25ml卡氏培养瓶中，置37℃的CO2孵育
箱内培养。约7～10天可见细胞从组织块周围萌出，待原代细胞生长融合达3/4培养面即
传代，将6～10代细胞传代于卡氏培养瓶(4×10４个/ml)，待细胞融合时，将培养基换成
20%胎牛血清(FCS)的M199培养液，24小时后再换成含0.5%FCS的M199培养液，同时加入
bFGF5μg/ml，相同样品4瓶，对照组不加FGF，3天后收集细胞，采用一步法提取细胞总
RNA［5］。用甲醛凝胶电泳鉴定，可见清晰的20S及18S两条带。OD260/OD280约为2。
2.动物分组实验及血管局部组织取材：Sprague-Dewley雄性大鼠(北京医科大学动
物室)，3～4个月龄，270～340g，麻醉后暴露颈动脉，送入Fogarty球囊导管反复拉3次，
造成颈动脉内膜损伤，结扎动脉远端，实验大鼠划分为四组：第一组为颈动脉内膜拉伤
后每日静脉注射40μg的bFGF(购自Sigma公司)；第二组为动脉内膜损伤后每日静注10mg bFGF
的抗体(购自Sigma公司，第一次为动脉内膜拉伤前5分钟)；第三组为单纯动脉内膜拉伤
大鼠；第四组为正常对照大鼠。前两组分别于用药1周，各组分别由第1周，第3周后处死
迅速取出实验血管段，投入液氮中制成组织匀浆。
3.羟脯氨酸(HYP)测定：取200ml组织匀浆测定HYP，间接反映组织胶原含量(HYP由
13.4%胶原构成)加入100%乙醛400μl置冰浴1小时，离心20分钟(12000g)，蒸发上清，
加入100μl的MilliQ-H2O，每个样品加入178000dpm［3H］-羟脯氨酸，加入2ml的6N HCl
水解24小时，水解物添加炭浆240mg/ml，离心10分钟(2000g)，弃上清后再加10ml的
MilliQ-H2O，取出100μl混悬液测定［3H］-羟脯氨酸缺失量及校上一页 [1] [2] [3] 下一页
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