孕期免疫治疗对母婴外周血单个核细胞中HBV DNA的影响

　　摘要：目的 探讨乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇行被动免疫或联合免疫治疗对母婴外周血单个核细胞(PBMC)中HBV DNA的影响。方法 HBsAg阳性孕妇自孕20周起至分娩前，34例行乙肝免疫球蛋白(HBIG)少量多次肌注(A组)，30例行乙肝免疫球蛋白联合乙肝疫苗(HBVac)肌注(B组)，23例不行任何治疗作为对照(C组)。以套式PCR法测定孕妇治疗前、分娩时及新生儿外周血单个核细胞中HBV DNA含量。结果 A、B组分别与C组比较，孕妇治疗后PBMC中HBV DNA水平下降率及新生儿PBMC中HBV DAN阳性率均无显著性差异(P>0.05)。结论 孕期被动免疫或联合免疫治疗对孕妇PBMC中HBV DNA无明显影响，亦不能降低新生儿的PBMC中HBV DNA阳性率。

　　关键词：乙型肝炎病毒;乙肝表面抗原;乙肝免疫球蛋白;乙肝疫苗;外周血单个核细胞

　　国内外学者对各型乙肝患者及乙肝表面抗原(HBsAg)阳性母儿的研究[1-4]表明，外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中均潜伏有乙型肝炎病毒(HBV)，并可在其中复制，致自身再次急性感染并感染他人，因此减少母儿PBMC被HBV侵犯具有重大意义。近年来，国内学者对孕妇应用以乙肝免疫球蛋白为主的免疫治疗，通过降低孕妇病毒血症水平，成功地降低了新生儿血清HBsAg及HBV DNA，有效阻断了HBV宫内感染[5-6]，但对孕妇应用以乙肝免疫球蛋白为主的免疫治疗能否影响母儿PBMC中HBV DNA状态，尚无报道。我们对HBsAg阳性孕妇在孕期行被动免疫或联合免疫预防治疗，以探讨不同免疫方法对母儿PBMC中HBV DNA状态的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 对象及分组 在我院产科门诊产前检查随访，并在我院分娩的HBsAg(+)孕妇87例，随机分为A组：被动免疫组30例，B组：联合免疫组34例，C组：对照组23例。三组孕妇在年龄、孕产次、分娩时孕周、分娩方式及用药前HBsAg、HBV DNA检出率等方面经均衡检验无明显差异。所有孕妇无肝炎史、肝功正常，无先兆流产、先兆早产及妊娠期高血压病等。该87例孕妇共分娩新生儿88例(其中A组1例为双胎)，无胎儿窘迫及新生儿窒息等病史。

　　1.2 方法

　　1.2.1 免疫治疗 A组孕妇分别于孕20、24、28、30、32、34、36周及37周后每周肌肉注射HBIG 100IU一次，直至分娩;B组每次臀大肌注射HBlG 100IU，同时三角肌注射重组乙肝疫苗(HBVac)20μg;C组孕妇整个孕期只随访查体，不予免疫治疗。

　　1.2.2 HBV DNA检测 孕妇于孕20周前(免疫注射前)和分娩时采肘静脉血3mL，加150IU肝素抗凝;新生儿出生后24h内(HBIG和HBVac使用前)采股静脉血2mL，加150IU肝素抗凝，分别于抽血后2h之内用比重1.077的淋巴细胞分离液常规分离PBMC，用Hanks液洗涤5次，保留最后1次上清100μL，以排除血清HBV DNA污染。分离后PBMC浓度调至6×104/mL，-20℃保存，统一提取HBV DNA。

　　采用套式PCR(nPCR)法测定。引物依HBV基因组相对保守的S区自行设计，由中科院上海细胞所合成。PBMC中HBV DNA第1次扩增阳性称为强阳性，第1次扩增阴性而第2次扩增阳性称为弱阳性。用药前强阳性转为用药后弱阳性或阴转，或用药前弱阳性转为用药后阴性定为HBV DNA水平下降。

　　1.3 统计学处理 采用SPSS 10.0分析软件，定性资料用χ2检验、校正的χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 新生儿PBMC中HBV DAN阳性率 检测新生儿PBMC中HBV DNA，A组35例新生儿(其中1例双胎)，11例阳性，阳性率为31.4%;B组30例新生儿，6例阳性，阳性率为20%;C组23例新生儿，8例阳性，阳性率为34.8%。A组与C组比较，无显著性差异(χ2=0.071，P>0.05);B组与C组比较，亦无显著性差异(χ2=1.464，P>0.05)。

　　2.2 孕妇PBMC中HBV DNA水平变化 分别检测各组孕妇治疗前及分娩时PBMC中HBV DNA，分娩时A组HBV DNA水平下降8例，其中1例为强阳性转为弱阳性，7例为弱阳性转阴，下降率为75%;B组HBV DNA水平下降6例，1例为强阳性转为弱阳性，5例为弱阳性转阴，下降率为38.4%;C组HBV DNA水平下降2例，均为弱阳性转

[1] [2] [3] 下一页