存备用。
1.2.4甲基化特异性PCR(Methylation 2specific PCR, MSP)甲基化特异性引物上游引物序列为5 TTACGAGGGGCGGTCGTACGCGGG 3 , 下游引物为5 AAAACGACCGACGCGAACGCCTCC 3 , 扩增片段为210bp。非甲基化特异性引物上游序列为5 TTATGAGGGGTGGTTGTATGTGGG 3 , 下游引物为5 AAAACAACCAACACAAACAACTCC 3 , 扩增片段为210bp,反应体系总体积为25μｌ, 甲基化反应条件为94℃ 5min 预变性，94℃ 30s, 65.6℃ 45s,72℃ 55s,共35个循环, 72℃延伸5min。非甲基化反应条件为94℃ 5min 预变性，94℃ 30s,61.2℃ 45s, 72℃ 55s,共35个循环, 72℃延伸5min。PCR产物5μｌ于1.5%的琼脂糖凝胶电泳,紫外线下观察拍照分析。
1.3统计学处理数据用±s 表示,采用SPSS10.0统计软件行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2. 1Runx3 mRNA在胃癌和癌旁组织中的表达Runx3和GAPDH引物的扩增基因片段经电泳和EB染色后，电泳结果显示扩增片段大小分别为353bp和208bp。Runx3表达量相对值在胃癌及癌旁组织中的表达，见表1。表1Runx3基因mRNA在胃癌及癌旁组织中的表达组织来源表达相对值（±s）tP胃癌组织0.5971±0.10136.7480＜0.01癌旁组织0.8297±0.2912表2Runx3基因甲基化在胃癌及癌旁组织中的表达组织来源甲基化表达(n)非甲基化
表达(n)χ2P胃癌组织433758.4360.001癌旁组织0802.2Runx3基因启动子甲基化在胃癌和癌旁组织中的发生率Runx3基因甲基化检测电泳染色后显示，癌旁组织内未发现Runx3基因启动子甲基化而胃癌组织标本中有53.75%(43/80)被检测到，见表2。
2.3Runx3的表达与胃癌临床病理相关因素的关系表3结果显示, Runx3 mRNA的表达与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05), 而与肿瘤部位及大小无关(P>0.05)。 表3胃癌组织Runx3基因mRNA
表达与临床病理特征的关系临床病理因素例数Runx3 mRNAχ2值和P分化程度低分化314χ2=3.950高分化4916P=0.047淋巴结转移有385χ2=5.414无4215P=0.020肿瘤大小<5cm5012χ2=0.071>5cm308P=0.790肿瘤部位胃窦4410χ2=0.269胃体3610P=0.604
3讨论Runt家族包括3个基因，其家族成员均具有含123个氨基酸的Runt Domain (RD区域)，Runx蛋白与Smad2、Smad3形成复合物传递TGFβ/activin信号，与人类疾病的发生密切相关。Runx3含有2个高度保守的CpG岛，其中一个富含GC启动子的特征CpG岛较大，位于Runx3基因启动子P2周围，控制Runx3基因转录[1]。目前研究发现消化道肿瘤，如胃癌、胆管癌、胰腺癌和肝细胞癌中均有染色体1p36异常[67]。Runx3基因作为一种肿瘤抑制基因,与多种肿瘤的发生、发展相关。在45%~60%的胃癌细胞系和胃癌组织中，有紧邻P2启动区的CpG岛的甲基化[8，9]。Li等研究发现在30%胃癌中有1p36.1的杂合性缺失，而Runx3的点突变则为1/119[10]。本研究结果表明胃癌中Runx3的表达量明显低于正常粘膜组织，Runx3在伴有淋巴结转移组中明显低于未转移组。说明在胃癌发生、发展过程中Runx3基因表达有缺失并且与胃癌分期有关，因此，近年来部分学者更倾向于Runx3基因是一种抑癌基因，在胃癌发生中起重要作用。Run
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