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天麻素紫外分光光度法定量探讨 |
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沈卫华 顾雪中
提要 通过紫外扫描发现天麻素的甲醇液在224 nm和272 nm处具有最大吸收峰，前者天麻素在2～12 μg/ml，后者在50～250 μg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系。
关键词 天麻素； 紫外分光光度法； 定量
天麻素系天麻的主要有效成分，天麻的质量控制在《中国药典》(1995年版)1部(第45页)中是利用高效液相色谱法，通过测定天麻素(Castrodin)的含量来实现的，因高效液相色谱仪在一般的基层检验单位大多还无条件具备，故本文试图探讨用紫外分光光度法建立标准曲线法的可行性。
1 实验材料与仪器
天麻素(批号807-9201)标准品由中国药品生物制品检定所提供；试剂甲醇为分析纯；仪器为岛津UV-1601。
2 样品的制备
精密称取天麻素标准品(80℃干燥1 h)50.0 mg，置50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度作为贮备液。再精密量取1 ml和25 ml分别至50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，浓度分别为20 μg/ml和500 μg/ml，备用。
3 测定波长的确定
对天麻素的样品液在200～400 nm范围内进行扫描，发现天麻素在紫外光区有二个吸收峰。见图1。
4 回归方程式的确定
分别在224 nm和272 nm处对天麻素的系列浓度进行测定，结果见表1、表2。
表1 天麻素的含量C与其吸光度A关系的实验数据( λ=224， n=3)
C(μg/ml) A C(μg/ml) A
2 0.134 6 0.393
8 0.496 10 0.652
12 0.758
表2 天麻素的含量C与其吸光度A关系的实验数据( λ=272， n=3)
C(μg/ml) A C(μg/ml) A
50 0.144 100 0.318
150 0.485 200 0.652
250 0.809
根据表1、表2，制得吸收曲线分别见图2和图3。
用最小二乘法，求得回归方程式分别为：(在224 nm处) C=15.88 A=0.1 277；(在272 nm处) C=300.4 A+5.334。
5 回归方程的相关性
上述建立的回归曲线和回归方程有无意义呢?让我们对它的相关性作显著性分析，利用回归系数，由样本值计算得相关系数分别为： γ(224 nm) =0.9989； γ(272 nm) =0.9998。在给定显著性水平 γ(3，0.001)=0.991，而实验所得的相关系数均大于 γ(3，
0.001)，说明根据实验数据确立的回归方程是有意义的，回归曲线为直线，可信度99.9%。
6 稳定性试验
天麻素的甲醇溶液在室温(20℃)观察4 h，1次/15 min，其吸收度变化 RSD=0.6%(224 nm)和0.1%(272 nm)。
7 检测限估计
按文献［1］所载，分光光度法的检测限以扣除空白后的吸光度值为0.01所对应的浓度值。把此值代入上述回归方程，则可得到检测限的估计值，在224 nm测定的检测限约为0.03 μg/ml；在272 nm测定的检测限约为8 μg/ml。
8 小结与讨论
8.1 根据对本实验所得数据及所进行的有关分析，证明天麻素的含量与其吸光度间存在着良好的线性关系。
8.2 测定波长的选定以实验中实际测得的最大吸收峰为准，因为通过对天麻素的甲醇液紫外扫描可知有二个吸收峰，但发现波长较小的峰在不同浓度下有明显漂移现象，在272 nm测定浓度范围内，另一波长在228 nm处，文献［2］也有记载。而当浓度在2～12 μg/ml时，其吸收峰为224 nm左右，这是药典对天麻的特征鉴别峰之一。故应特别注意。
8.3 在有效的分离手段(如层析分离等)的帮助下，可利用本法建立标准曲线，对天麻或含有天麻的制剂中的天麻素进行[1] [2] 下一页
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