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iNOS抑制剂对兔关节软骨修复组织胶原表达的影响 |
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sp;NO作为体内重要的信号传导分子，已证实在骨关节炎发病和转归方面有重要作用。我们以前的研究也提示iNOS抑制剂SMT能提高软骨修复组织的质量［1，2］，但由于技术的原因，均未能对软骨修复组织内胶原变化，特别是Ⅰ型和Ⅱ型胶原作定量分析，以阐明修复组织胶原的变化规律，从而提高修复组织质量。天狼猩红是阴离子强酸染料，易与胶原纤维中的碱性基团反应。胶原纤维在偏振光下有正的单轴双折光属性，与天狼猩红结合可增强双折射，提高分辨率［3］。Junqueira等［4］最早将苦味酸²天狼猩红染色法应用于组织切片的胶原检测，国内也曾用于纤维表达等方面的研究［5，6］。
既往研究虽然采用了多种方法促进软骨修复，许多报告均能在早期获得缺损区透明软骨的生成。但是这些修复组织无论是在生物学结构和形态方面，还是生物力学方面，均与正常软骨不同。而且这些修复软骨组织较差的功能及耐用性，随后导致退行性退变，被纤维组织代替［7、8］。Ⅱ型胶原是软骨组织最主要的成分，可作为软骨的表型标记，决定了关节软骨特性，是评价软骨修复质量的标志之一。既往采用免疫组化技术不仅抗体
来源不易，价格昂贵，操作费时，而且只能在不同切片上观察胶原的分布情况。而苦味酸²天狼猩红染色法可以在一张切片上同时显示出各种胶原的分布及其相互的关系，有利于观察软骨修复过程中各种胶原变化的规律。随着计算机分析技术的成熟，根据不同的颜色和灰度定量分析胶原分布成为可能。我们首次采用苦味酸²天狼猩红染色法并与病理体视学方法结合，检测软骨修复组织中Ⅰ型和Ⅱ型胶原的分布，以观察一氧化氮合酶抑制剂SMT对软骨表型维持的影响。但天狼猩红染色对于区分Ⅱ型和Ⅲ型胶原尚不理想，我们采用正常软骨的Ⅱ型胶原为基准来校正软骨修复组织中Ⅱ型胶原，以此区分Ⅲ型胶原。同时，软骨修复中Ⅲ型胶原的表达较少。图像分析结果显示，SMT组软骨修复组织在术后1年Ⅰ型胶原明显少于BMP组和对照组，Ⅱ型胶原多于BMP组和对照组。
本实验结果提示，SMT的应用对维持软骨修复组织的表型方面具有积极作用。但软骨的修复组织与正常软骨相比仍然有一定差距，尤其是异位骨化及接合处的退变。但苦味酸²天狼猩红染色法无疑是一种观察软骨修复组织中胶原类型、分布、含量及变化较理想的方法。
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