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血管生成抑制剂Canstatin联合豆蔻提取物治疗荷瘤裸鼠实验研究 |
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【摘要】 目的：探讨canstatin联合豆蔻提取物对人胃癌细胞株SGC7901胃癌模型裸鼠肿瘤生长的影响。方法：建立裸鼠原位移植人胃癌模型，将模型裸鼠随机分为Canstatin组、豆蔻提取物组、联合用药组，同时设立对照组，对原位种植胃癌的体积和抑瘤率、肿瘤微血管密度进行观察，行凋亡指数检测。结果：豆蔻提取物组、Canstatin组、联合用药组的抑瘤率分别为28.8%、38.9%、44.1%;豆蔻提取物组、Canstatin组、联合用药组、对照组的肿瘤微血管密度(MVD)分别为23.81±8.15、21.50±9.17、19.01±7.15、29.45±6.72。结论：豆蔻提取物与Canstatin均可以抑制荷瘤裸鼠移植瘤的生长，促进移植瘤细胞的凋亡，降低肿瘤微血管密度，但以联合作用效果显著。
【关键词】 荷瘤裸鼠 Canstatin 豆蔻提取物
白豆蔻属姜科植物，性味辛温，归肺、脾、胃经，具有化湿行气，温中止呕作用。常用于治疗“胃反”、“噎膈”等病症。1995年日本药局方注解(第六改正)有白豆蔻治疗胃癌的记载。Canstatin是Kamphaus发现的一种新的血管生成抑制因子[1,2]，具有较强的抑制血管内皮细胞增殖、迁移及诱导内皮细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的作用。本实验借助荷瘤裸鼠胃癌模型，观察Canstatin联合豆蔻提取物对人胃癌细胞的影响，报道如下。
1 实验材料
1.1 实验动物 Balb/c/nu/裸鼠，SPF级，4～6周龄，体重18～20g，雄性，层流柜内分笼饲养，灭菌处理水和辐照饲料供动物自由摄取，购于扬州大学实验动物中心。
1.2 实验药物 豆蔻提取物、Canstatin扬州大学中西医结合研究所提取。
1.3 主要试剂及仪器 人胃癌SGC7901细胞株(中国科学院上海细胞研究所);兔抗人FⅧ因子相关抗原抗体试剂盒(北京中山生物技术有限公司);RPMI1640培养基(Gibco);小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);胰蛋白酶(Difco);DMSO(分析纯，Amresco);青霉素80万单位 、链霉素100万单位(华北制药股份有限公司);二氧化碳培养箱(Heraeus);倒置显微镜(Olympus);超净工作台(苏净集团安泰公司);电子天平(上海天平仪器厂);-20℃低温冰箱(Sanyo);-80℃超低温冰箱(Becton Dikinson)。
2 实验方法
2.1 细胞培养及传代 用含10%小牛血清的RPMI1640培养基，在37℃5%CO2浓度，饱和湿度条件下常规培养，一般约1～2天换液1次。贴壁细胞铺满瓶底80%以上时需要消化传代。选取处于对数生长期的细胞用于实验。
2.2 造模与分组 收集对数生长期的细胞，制备成浓度为5×107/ml的单细胞悬液，后在超净工作台内于裸鼠腹股沟区皮下注射0.2ml的单细胞悬液，注射局部出现明显皮丘，7天后所有裸鼠均出现直径大于5mm的皮下结节，移植瘤模型建立，皮下移植瘤待用。
将32只裸鼠造模后随机分成豆蔻提取物组、canstatin组、联合用药组、对照组，每组8只。豆蔻提取物组给予豆蔻提取物20mg/(kg·d)灌胃及PBS 0.2ml/d腹腔注射;Canstatin组给予Canstatin 10mg(kg·d)腹腔注射及PBS 0.2ml/d灌胃;联合用药组给予豆蔻提取物20mg(kg·d)灌胃及Canstatin 10mg(kg·d)腹腔注射;对照组给予PBS 0.2ml/d灌胃及腹腔注射;各组用药均连续2周。
2.3 观察指标及方法
2.3.1 原位种植胃癌的体积与抑瘤率观察 停药后第2天处死裸鼠，剥离瘤组织，称取瘤重，通过实验组移植瘤的瘤重与空白对照组瘤重相比较计算抑瘤率，即瘤重抑瘤率=(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%。
2.3.2 细胞凋亡率的检测 于移植瘤周边取部分肿瘤组织，固定于70%的冰乙醇，通过研磨及胃蛋白酶消化后制备成单细胞悬液低速离心去细胞碎片，洗涤，离心分离部分细胞，于室温避光染色后上流式细胞仪进行细胞凋亡率测定[3～5[1] [2] [3] 下一页
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