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头部重点低温复苏轻伤兔脑神经元的机理探讨 |
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head cooling，the parameter correlating with the changes of type A was Ca2＋，Mg2＋-ATPase（P＝0．019）．Conclusion：Selective head cooling do ameliorate the post-ischemic reperfusion
injury and resuscitate the mildly damaged neuron．The main mechanisms may include promoting the recruitment of membrane function and curtailing off the state of hypermetabolism．
Key word Selective head cooling Brain resuscitation Reperfusion injury
头部重点低温综合疗法(SHC)迄今为止是最有效的脑复苏方法之一，在我院已经成功救治心跳停止4～8分钟以上患者30余例，但对其作用机理还在进一步研究之中〔1～4〕。我们检测了兔脑缺血30分钟后再灌流时脑组织中21项内源性伤害因子的变化，并采用计算机图象分析技术将兔脑神经元进行分类和计量〔5～12〕，比较了是否实施SHC对内源性伤害因子的水平和各类神经元的所占百分比之间相关系数的影响，试图说明SHC能否减轻神经元所遭受的缺血再灌流损伤和改善轻伤脑神经元的转归。
材料与方法
1.动物 健康新西兰兔168只，体重1.8～2.2kg。实验前禁食12小时。
2.手术 动物接受静脉麻醉(1%异戊巴比妥钠6ml/kg、芬太尼10μg/kg)，气管切开后行机械通气，保持PaO2＞13kPa和PaCO24～6kPa。然后按“四血管”式复制兔脑完全性缺血30分钟。
3.降温 近枕叶颅骨钻一小孔，置入针样热敏探头测得脑温。再灌流开始时实施降温，采用头部冰帽和流动冰水浴的体表降温方法，均去净头毛和辅用冬眠合剂，要求30分钟内降至脑温为28℃，肛温为34℃〔5〕。
4.动物分组 实验动物随机分为三组：Ⅰ组仅分离血管，为未缺血对照；其余两组的3个亚组分别于缺血30分钟后再灌流30、180和360分钟时处死；Ⅱ组保持常温再灌流，Ⅲ组动物全部降温(表1)。
表1 实验动物分组
对照组(Ⅰ) 常温再灌流组(Ⅱ) SHC组(Ⅲ)
A B C A b C
缺血时间(分钟)
再灌流时间(分钟)
动物数(只) 0
0
24 30
30
24 30
180
24 30
360
24 30
30
24 30
180
24 30
360
24
5.内源性伤害因子检测 将动物按预定时间处死。0℃环境下快速分离出脑皮层组织。置-150℃液氮中贮存，制备脑细胞膜粗样(BCM)和去膜组织匀浆(PMS)后测定以下内源性伤害因子〔5～12〕：BCM上Na＋，K＋-ATPase、Ca2＋，Mg2＋-ATPase、Mn2＋-ATPase和磷酶A2(PLA2)活力，膜磷脂(Pi)，PMS中葡萄糖(Glu)，谷氨酸氨(GLU)和天门冬氨酸(ASP)含量，CPK，LDH和GOT的活力，脑组织含水量，下丘脑中β-内啡肽(β-EP)，血管活性肠肽(VIP)，血管紧张素(AVP)和TSH，脑静脉血中T3、T4和TXB2、PGI2。
6.形态学观察 切片H-E染色后，用真彩色图像分析系统做图像分析。分为A(正常)、B(轻伤)、C(重伤)和D(坏死)类神经元。由计算机对神经细胞图像进行分割处理、分类计数和计算所占百分比〔11〕。
7.统计方法 所得数据全部进入数据库，然后采用统计包(SPSS6.0)做相关分析(神经元所占百分比与内源性伤害因子水平)和t检验，P＜0.05认为有显著性差异。
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