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P21蛋白对阴茎癌淋巴结肿大的诊断价值 |
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40枚。另30枚正常淋巴结由我校解剖教研室提供。P21蛋白单克隆抗体和ABC试剂购自北京中山生物工程公司。
1.2 制备方法
用60℃石蜡包埋组织，作5 μm厚切片，常规脱蜡，梯度乙醇水化，用0.5%双氧化一甲醇溶液除去内源酶。1%牛血清白蛋白保护，用PBS水洗，加P21蛋白单克隆抗体，于37℃下反应90 min，用PBS水洗，加Biotin标记的兔抗鼠IgG，于37℃下反应90 min，用PBS水洗，再加ABC酶复合物，于37 ℃下反应90 min，用PBS水洗，最后用DAB显色，苏木精轻淡衬染，用二甲苯透明并封片镜检。以细胞膜或细胞浆出现黄色颗粒为阳性，不着色为阴性。
2 结果
三种不同性质淋巴结中P21蛋白的表达见表1。
表1 三种不同性质淋巴结中P21蛋白的表达
标本 枚
数 P21蛋白阳性 P21蛋白阴性
枚数 百分率(%) 枚数 百分率(%)
癌性淋巴结 40 37
92.5
3
7.5
炎性淋巴结 40 9 22.5 31 77.5
正常淋巴结 30 0 0 30 100
从表1中可见，癌性淋巴结P21蛋白阳性率为92.5%，而病理检查证实为炎性淋巴结P21蛋白阳性率为22.5%。这部分淋巴结虽然在形态学上不具备癌的特性，但在癌基因表达方面已表现出癌的性质。这些病例于6和17个月相继出现局部复发和骨盆转移。
炎性淋巴结中P21蛋白的表达与术后局部复发和转移的关系见表2。
表2 炎性淋巴结中P21蛋白表达与术后复发和转移的关系
炎性淋巴结 枚数 局部复发
时间/月 骨盆转移
时间/月
P21蛋白阳性 9 6 17
P21蛋白阴性 31 35 49
从表2中可见，在40例炎性淋巴结中，P21蛋白阳性表达9例，分别于术后6个月和17个月出现局部复发和骨盆转移；P21蛋白阴性表达31例，分别于术后35个月和49个月出现局部复发和骨盆转移。结果提示P21蛋白检测可以作为肿瘤复发、转移和预后效果判定的客观指标之一。
3 讨论
近年来的研究表明，人类肿瘤中最常见的癌基因之一是ras基因族，而P21蛋白是ras基因族中一种共同表达产物。ras基因的激活与细胞恶变有关〔2〕。众所周知，淋巴结是癌转移最早的部位，但目前尚未见到P21蛋白与肿瘤淋巴结肿大的相关性报告。我们采用免疫组织化学ABC法分别检测了阴茎癌患者腹股沟癌性和炎性淋巴结各40枚，并以用福尔马林液保存半年的腹股沟正常淋巴结30枚作对照，结明表明P21蛋白在转移癌淋巴结中的阳性率为92.5%，而病理检查证实炎性淋巴结P21蛋白阳性率为22.5%。虽然炎性淋巴结P21蛋白阳性率明显低于癌性淋巴结P21蛋白表达，但这部分病例仍于术后6个月和17个月发生局部复发和骨盆转移，对照组正常淋巴结无P21蛋白表达。因此，我们认为，病理检查证实为炎性淋巴结P21蛋白阳性表达者的细胞可能是已经启动的尚未产生表型转化的已具备肿瘤增殖能力的癌前细胞，而这些细胞正是病理学上难以确认的。由此认为，在病理学上无法确认阴茎癌肿大淋巴结的性质时应检测P21蛋白，可提高癌前状态或癌前病变的诊断水平。
从染色结果看，癌性淋巴结P21蛋白染色强度较深，呈棕黄色，而炎性淋巴结P21蛋白染色强度较淡，呈淡黄色，但与正常淋巴结染色仍有明显区别。所以，我们认为这部分细胞为癌前细胞群。
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