，任何不同的变性温度与不同的复性温度之间循环，能得到2倍增高的正确或不正确的产物，在随后的退火温度继续下降的过程中，上述的延伸合成会继续进行。最初设计TDPCR是为了降低普通PCR中出现的假阳性 ，因此TDPCR常用于存在假阳性的临床检测。此后Piraee M等人应用并改进了上述技术[3～5]。国内此项技术应用较少，仅见个别报道。万兵等在构建人CDl37hlgGlFcpCDNA3融合蛋白真核表达载体过程中运用TDPCR扩增目的基因[6]。张贵星等人在克隆盐藻D.bardawil的胡萝卜素生物合成相关(carotene biosynthesis related，cbr)基因的启动子过程中，对TDPCR进行了改进[7]。季策等人在建立拟南芥AtSUC9PCR反应体系时运用了TDPCR技术[8] 。
我们在本次实验中比较了普通PCR 和TDPCR间的特异性差别，并使用了含有抗Taq抗体的Taq酶(即TaKaRa Taq Hs)以期待达到PCR反应的最优化条件。实验结果均表明，在同样的最优化条件下及使用同一模板(1例健康人类外周血基因组DNA)情况下，普通PCR产物中仍出现非特异性二聚体及部分片状拖带，可能导致测序结果出现部分干扰波，TDPCR产物中未见非特异性二聚体及部分片状拖带，目的条带清晰明亮，由此可以证实TDPCR完全可以用于降低或避免由以下原因所致的假阳性：空气中的小片段核酸污染;短序列引物;非特异性扩增带;Tm(变性温度)值具有一定差距的1对引物;复杂的模板DNA，如基因组DNA。同时也说明TDPCR反应的扩增效率及特异性较普通PCR高，基本达到本次实验最高水平。综合比较普通PCR和TDPCR，我们认为前者虽然程序简单，在一般的PCR仪都可完成，但缺点是退火温度不适当时容易出现假阳性;而TDPCR虽然程序复杂，并需要PCR仪有较大的内存，但能非常有效地降低或避免假阳性，且在同样的工作条件(比如最佳Mg2+浓度、Taq酶)可扩增出更高特异性的产物。此次实验证实成功建立TDPCR的方法，仅需应用一套温度程序扩增，既可对VHL基因全部3个外显子进行检测，并能在1 d内完成。本方法的建立为VHL基因的突变筛查分析提供了快速可靠的方法，具有一定的临床研究使用价值。
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