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9 1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制 |
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于杀 伤或作为混合淋巴细胞培养(MLC)中的反应细胞。混合淋巴细胞培养参照文献［3］： 将1.5×106 PBMC和0.5×106经3 000 Rad照射的Daudi细胞接种于24孔板中，37C、5% CO2孵 箱培养5 d后，加入100 U/ml的IL-2继续培养3 d，收集细胞，作为RKA实验的效应细胞。
1.2.2 51Cr释放实验［4］ 收集对数生长期的P815细胞， 加入51Cr至1 00 μCi/1.0×106细胞，于37°C、5%CO2孵箱中标记2 h，每隔15 min摇匀1次，标记 完 毕后洗涤3次，调整细胞浓度至1.0×105 ml-1，加入V型板中，100 μl/孔，作为R KA中的靶 细胞；按效靶比加入相应的效应细胞，其中效应细胞预先和相应的抗体于37°C孵育30 min 。 杀伤时于37C、5%CO2孵箱中放置4 h。每孔收集100μl上清，测γ射线cpm值，按以 下公式计算杀伤率：
1.2.3 TNF-ɑ的测定收集MLC细胞，加入相应抗体于37C孵育30 min ，调整细胞浓度至1 .0×106 ml-1，取100μl加入预先加有未标记同位素1.0×104 P815细胞的V型 板中，于37C、5%CO2孵箱中放置4 h后收集上清，ELISA方法测定TNF-ɑ的含量。
2 结果
2.1 9.1C3抑制PBMC在RKA中的杀伤作用 图1显示CD16抗体在RKA中能诱导 静止PBMC对P815细胞的杀伤作用，这与以往的报道相吻 合［1］。但同时加入9.1C3抗体后，几乎完全抑制由CD16抗体诱导的对P815的杀伤作 用。CD57抗体作为对NK细胞杀伤无影响的阴性对照。这表明9.1C3能抑制活化型受体C D16介导的杀伤作用。
2.2 9.1C3抑制MLC效应细胞在RKA中的杀伤作用 以MLC活化的淋巴细胞为 效应细胞，观察 到9.1C3抗体在RKA实验系统中对杀伤的抑制作用。从图2可以看出，MLC来源的效应细胞 对P8 15细胞有一定的杀伤，在效靶比为8：1、4：1和2：1时杀伤率分别为20.5%、13.2%和9.8%。这种杀伤作用能被9.1C3抗体完全抑制。在RKA实验系统中加入CD16抗体时，效应细胞对P815 细胞的杀伤作用显著增强，在效靶比为8：1、4：1和2：1的杀伤率为82.2%、56.7%和53.5% ，比对照组分别增加4.7、5.0和5.9倍；但同时加入9.1C3抗体时，效应细胞对P815细胞 的杀 伤作用被明显抑制，在效靶比为8：1、4：1和2：1的杀伤率为12.4%、7.1%和3.4%，抑制率 分别为84.9%、87.5%和93.6%。9.1C3这种抑制作用与加入抗体的浓度呈剂量依赖关系，随着 抗体浓度的降抵抑制作用减弱，效靶比为10：1，CD16抗体浓度为5 μg/ml,见图3。
图1 9.1C3抑制PBMC在RKA中CD16介导的杀伤作用
Fig.1 Inhibitory effect of 9.1C3 antibody on
CD16 induced cytotoxicity of PBMC in RKA
图2 9.1C3抑制MLC效应细胞在RKA中CD16介导的杀伤 作用
Fig.2 Inhibitory effect of 9.1C3 antibody on CD16 induced
cytotoxicity of MLC effector in RKA
图3 9.1C3抑制CD16介导杀伤作用的剂量依赖关系
Fig.3 The inhibitory effect of 9.1C3 antibody on CD16-induced
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