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环磷酰胺诱发大鼠胸腺细胞凋亡的研究 |
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王冠军 李薇 蔡露
摘 要 目的：研究环磷酰胺的免疫抑制作用机制。方法：以大鼠胸腺为对象，采用细胞凋亡的原位特异性染色及DNA凝胶电泳的方法，观察不同剂量、不同时间环磷酰胺处理后胸腺细胞的凋亡现象。结果：剂量为20 和70 mg/kg 的环磷酰胺可引起广泛的胸腺细胞凋亡。该作用最早发生在环磷酰胺处理后的8 h，12～24 h最明显，48 h消失。结论：环磷酰胺的免疫抑制作用可能是通过诱导免疫细胞凋亡而产生的。
关键词 环磷酰胺 细胞凋亡 胸腺细胞
中国图书分类号 R392
Induction of apoptosis in rat thymus by cyclophosphamide
WANG Guan-Jun ,LI Wei，CAI Lu.Institute of Heamotological Disease，Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130021
Abstract Objective:To understand the mechanism of immunosuppression of cyclophosphamide. Methods: Investigate if cyclophosphamide produces the immunosuppression by the induction of apoptotic cell death in thymus .Results: 20 and 70 mg/kg cyclophosphamide could induce markedly apoptosis in rat thymus at 12 h after treatment ,the apoptotic cell death took place at 8～24 h and disappeared at 48 h after cyclophosphamide treatment. Conclusion： Cyclophosphamide may causes immunosuppression through the induction of apoposis of thymocyte.
Key words Cyclophosphamide Apoptosis Thymus
细胞凋亡(Apoptosis)是一种广泛存在于生物体系中又严格受基因程序调控的生理现象，近年来发现在免疫系统中也同样存在PCD，这种方式在胸腺未成熟T细胞的去除、T细胞克隆的无能化、自我耐受、免疫缺陷病毒感染后T细胞减少等生理、病理过程中都有重要作用［1］。本文所要探讨的是免疫治疗过程中的细胞凋亡。
1 材料与方法
1.1 实验分组及动物处理 雄性 sprague-Dawley大白鼠，体重375～400 g，分2组：第1组大鼠经灌胃食入70 mg/kg环磷酰胺后，不同时间(0、4、8、12、18、24及48 h)杀鼠取胸腺，称重后迅速将部分组织冻存于液氮中，其余组织于福尔马林中固定；另一组经0、2、7、20和70 mg/kg环磷酰胺处理12 h后杀鼠取胸腺，处理同上(每个剂量点和时间点用5只鼠)。
1.2 细胞凋亡特异性染色 胸腺经福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片，酒精脱水。细胞凋亡特异性染色用美国oncor公司的Apop-Tag-Peroxidase 原位细胞凋亡检测试剂盒［2］。
1.3 DNA凝胶电泳分析 于液氧中保存的组织，经研磨器在预冷的条件下研碎，酚、氯仿法提取DNA，uv检测DNA含量，取10 μg DNA经琼脂糖凝胶电泳(1.8%琼脂糖、20 V电压、2～3 h)后，溴化乙啶染色，uv灯下照像。
2 结果
第1组大鼠经灌胃食入70 mg/kg环磷酰胺后，0 h 测胸腺重量为225±34 mg，自12 h 开始下降，48 h 下降至100±23 mg(图1A)，且有明显统计学意义(P＜0.05)，第2组于环磷酰胺(0～70 mg/kg)处理12 h后未见明显胸腺重量下降(图1B)。
图1 环磷酰胺处理后对大鼠胸腺重量的影响
Fig.1 The influence after treatment of[1] [2] 下一页
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