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1995 1997年中国部分地区麻疹病毒流行株基因型分析 |
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孙英杰1 Li Jin2 葛 力3
摘要 本文报道以反转录二步多聚酶链反应方法(RT-PCR)直接测定麻疹病人唾液、尿液标本中的麻疹病毒(MV)血凝基因(H)、核衣壳基因(N)。以RT-PCR产物纯化后进行MV 450nt H、282nt N基因核苷酸片段测序分析，测序结果一致表明，1995～1997年期间中国部分地区MV流行株存在两种基因型。其中一种基因型只发现1株，与EDw54株相同，另一种基因型占流行株的绝大多数(称新基因型)，与其它国家以前报道的MV流行株基因型的N基因最大差异为15.4%与EDw54、疫苗株相差8.8%；H基因最大差异是10.8%。
关键词 麻疹病毒 RT-PCR 序列分析
Geneotic Analysis of Wild Type Measles Viruses Circulating in China During 1995-1997 Sun Yingjie*， Li Jin, Ge Li. *Liaoning Provincial Anti-Epidemic and Health Station Shenyang,China 110005
Abstract To investigate the molecular epidemiology of measles virus (MV) in China, sequence analysis of MV was performed based on a 282-nt region of the nucleoprotein (N) gene and a 450-nt region of heamaglutinin (H) gene by direct sequencing of RT-PCR amplicons obtained from clinical specimens. Results revealed that one MV strain belonged to ED-like genotype and remainder strains were clustered into a new genotype which was distinct from Chinese vaccine strains and MV strains circulating in other countries, as previously described representing a new genotype. There was up to 15.4% divergence in the nt-282 N gene and 10.8% divergence in the nt-450 H gene between the new genotype and other genotypes.
Key words Measles virus RT-PCR Sequence analysis
麻疹病毒自1954年首次分离成功后(Edmoston-54株，简称EDw54)，40多年来一直认为MV为单一血清型，但是近年来随着分子生物学技术的发展，对MV-RNA的研究有所进展。目前，美国、英国等国家已发现MV流行株有不同的基因型［1～6］，特别是Rota PA(1995)［3］报道了美国及世界各国1988～1995年期间MV基因型有6种；Jin L(1997)［5］报道了英国1992～1995年期间MV流行株基因型有3种。为了解中国MV流行株基因型，1995～1997年期间我们采集辽宁省7个市及来自河南、河北两省的麻疹病人急性期的唾液、尿液标本以RT-PCR方法直接测定MV-RNA。PCR产物纯化后进行MV-H、N基因核苷酸片段测序分析，基因分型。
材料和方法
一、标本：1995～1997年期间采集辽宁省盘锦、沈阳等7个市及来自河南(郑州)、河北(石家庄)的麻疹病人急性期的唾液46份、尿液32份、血清46份。标本采集后置－20℃保存备用，血清用于抗MV-IgM检测，尿液和唾液用于MV-RNA检测。
二、抗MV-IgM测定：使用中国药品生物制品检定所生产的抗MV-IgM ELISA试剂盒，具体方法按说明进行。
三、RT-PCR引物：研究所用MV-H、N基因引物均由Central Public Health Labolatory UK(CPHL.UK)提供，其结构如下：H1(＋7844) 5′ACATCAAT[1] [2] 下一页
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