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中间偃麦草单条染色体分离及体外扩增 |
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李连城 何聪芬 徐琼芳 马有志 辛志勇
摘 要：本研究利用微细玻璃针法从减数分裂中期I的花粉母细胞中分离回收了携带小麦抗黄矮病基因的中间偃麦草染色体2Ai－2。将目标染色体放入装有蛋白酶K消化液的05ml小离心管中，用Sau3AI酶切，在DNA片段的末端连接接头后，进行 PCR扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，DNA片段的大小在150～3000bp之间，而大部分集中在200～1500bp之间。
关键词： 染色体；微分离；LAPCR；中间偃麦草
中图分类号： Q813.4 文献标识码： A 文章编号：0253－9772(2000)04－0197－04
Microisolation and Amplification in vitro of Single
Th.intermedium Chromosome
LI Lian-cheng XU Qiong-fang MA You-zhi XIN Zhi-yong
（Institute of Crop Breeding and Culture,CAAS,Bejing 100081,China）
HE Cong-fen
（Biology Department of Hebei Normal University, Sijiazhuang 050016,Chian）
Abstract:A simple method was used to adapt refined needles for the collection of Th.intermedium 2Ai－2 chromosome carrying BYDV (barley yellow dwarf virus) resistance gene from meiosis－metaphase spreads .The aimed chromosome was put into a 0.5ml Eppendorf tube,deproteinized with proteinase K,digested with Sau3AI,and link－adaptors were ligated to the ends of the DNA fragments.After amplification by PCR,size distributions of the PCR products were analyzed by agarose gel electrophoresis and smears of DNA were revealed that the size ranged from 150bp to 3000bp with predominant fragments at about 200～1500bp.
Key words:chromosome;microisolation；LA－PCR；Th.intermedium
自Scalenghe等[1]首次将染色体显微切割与微克隆技术在果蝇唾腺染色体上取得成功，这项技术很快被应用到动物及人类的染色体研究上，并取得了很大的进展[2,3]。该技术被移植到植物上，目前，已在甜菜[4]、大麦[5]、小麦[6]、黑麦[7]、燕麦[8]的遗传图谱的绘制、特异性探针的筛选、染色体原位杂交等方面取得许多很有价值的成果。
小麦黄矮病是由大麦黄矮病毒（barley yellow dwarf virus BYDV）引起的小麦主要病害之一。防治小麦黄矮病的有效措施是选育耐病抗病品种。异附加系Z2 (2n=44)是通过普通小麦与小麦－中间偃麦草（Thinopyrum intermedium,2n=42,E1E1E2E2XX）部分双二倍体无芒中4 (2n=56)杂交、回交选育而
成[9]，高抗黄矮病。由于Z2的小麦亲本宛7 107不抗BYDV，说明Z2的抗BYDV基因来自附加的中间偃麦草染色体。同工酶及RFLP分析证实Z2的外源染色体属第二部分同源群的2Ai－2染色体[10]。因此，分离2Ai－2染色体，建立其染色体DNA文库，将为筛选与BYDV抗性基因紧密连锁的分子标记和为进一步分离抗黄矮病基因奠定基础。
1 材 料 和 方 法
1.1 材料
选用中间偃麦草染色体附加系Z2（2n=44）与普通小麦品种宛7107的杂种F1为实验材料。
1.2[1] [2] 下一页
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