|
淋病奈瑟菌感染诊断技术研究进展 |
| |
梁巧明 综述 杜江 审校
淋病是目前世界上性传播疾病中发病率最高的一种,也是近年来我国最常见的性病。淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)除引起泌尿、生殖系粘膜表面的急、慢性化脓性感染外,尚可经血行播散导致全身性感染,如延误诊治甚至造成患者死亡。及时、正确的诊断至关重要,本文仅对现有的诊断方法及其优缺点作一综述。
1 涂片法
取分泌物涂于玻片上,行革兰染色,如在多形核细胞内找到革兰阴性双球菌,则为阳性。在急性淋菌性尿道炎的患者中,涂片镜检大多可查获病原体,该法简便易行,但敏感性及特异性差,且有假阳性,尤其在慢性、无症状的患者和为了判断是否治愈时该法不适用。
2 培养法
是诊断NG感染的“金标准”,由于NG离体后易自溶死亡,所以采用床边接种于含有多种适量抗生素的巧克力琼脂或血琼脂选择性培养基,置37℃,70%湿度,含5%二氧化碳条件下培养24～48小时,可观察到典型淋球菌菌落,挑单个菌落进行涂片、染色,氧化酶和糖发酵试验鉴定,培养阳性率报道不一,与标本、培养等条件有关。本法最大的优点是可以同时获得抗原制备、药敏试验、分型和致病性研究等所需的细菌,但要求一定的培养条件及技术,而且实验时间较长,不能达到快速检测的目的。
3 免疫学方法
目前主要有酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、葡萄球菌A蛋白协同凝集试验(coagglutination assay,COA)、尿液淋菌酶法、免疫荧光法等。其中最常用的是ELISA。运用NG的特异性抗血清或单克隆抗体检测标本中的NG抗原,不但可以确定NG的存在,还可对其进行分型。1997年段薇等［1］用该法检测316份样本,与临床诊断符合率为98.1%,与脑膜炎双球菌等16种细菌无交叉反应,最低检出菌数为7.8×104个/ml,与培养法比较,其阳性符合率为96.5%,阴性符合率86.9%;ELISA具有操作简单、快速准确、敏感性高、重复性好的特点,是目前比较成熟的检测方法之一,值得在临床推广应用。利用金黄色葡萄球菌A蛋白(SAP)具有吸附IgG的FC段的特性,建立了淋球菌的协同凝集试验,该试验不需特殊设备,几分钟就能得结果,与ELISA一样,只要标本中有淋球菌抗原就可出现反应,不需要活菌,从而避免了标本保存和运送过程中的各种较高条件,但COA试验需106个/ml菌体才能出现凝集反应［2］,敏感性稍逊于ELISA。1998年范丽君等［3］用尿液淋菌酶法检测了144例泌尿系感染的标本,与细菌培养法的符合率为99.1%。免疫荧光法需要一定的仪器设备,不易在基层性病防治单位推广。
4 核酸探针杂交法
Totten等人［4］首次用核酸探针杂交技术检测NG以来,已制备了多种基因探针,其中隐蔽性质粒中CPPB基因是比较理想的探针之一,Torres［5］用该探针并采用非放射性地高辛标记系统,与170株淋球菌和其他相关菌株进行了杂交,结果所有淋球菌均与探针杂交。利用核酸探针杂交法还可通过非培养技术检测产青霉素酶淋球菌(penicillinase producing neissera gonorrhoeae,PPNG),制备PPNG7.2Rb质粒探针,采用DNA直接酶标-化学发光自显影技术标记,通过斑点及southern印迹杂交,可用于临床标本直接检测,避免了传统的培养、鉴定、药敏试验等繁琐步骤,明显缩短了获得结果时间,及时为临床选择用药提供依据［6］。
5 核酸扩增法
主要包括聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和连结酶链反应(ligase chain reaction,LCR);PCR是一种体外扩增特异性基因片断的技术,具有敏感性高特异性强的优点,目前有多引物PCR(coamplification PCR)［7］、单管巢式PCR(single-tube nested PCR)［8］等,多引物PCR具有一次可检测多种病原体,快速、敏感、简便、特异的优点,但需注意引物的竞争抑制现象。PCR易受试剂盒制备、实验室条件、操作技术等因素的影响,致使其敏感性、特异性差别很大,其中引物的优劣非常重要,陈德利等［9］以NG质粒为模板,从CPPB序列中选择引 物 上游5'-3'TCGCCCAAGTGCGTTAGG,下游5'-3'TCAAGCCCTATCTGTGGAGC,扩增片段319bP,取得了较好结果。另外临床标本的科学处理,PCR污染的预防,假阳性、假阴性结果的质控都缺一[1] [2] 下一页
上一个医学论文： 脑卒中与睡眠呼吸暂停综合征相关性研究
下一个医学论文： 血小板膜糖蛋白GP b a受体拮抗剂在急性冠状动脉综合征中的临床应用
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 临床医学论文 >> 正文