【摘要】 目的：建立一种便于开骨窗及肿瘤切除的近皮层大鼠C6胶质瘤模型。方法： 立体定向下将C6细胞接种于大鼠脑皮层、白质交界处，建立近皮层荷瘤鼠模型。取7只模型鼠，分别于接种的第7、11、15天行头颅MRI检查，了解肿瘤的生长情况。行病理HE切片观察、流式细胞DNA细胞周期分析及GFAP免疫组织化学检测，了解肿瘤的生长特性和病理特征。5只荷瘤鼠及2只正常大鼠经尾静脉注入5ALA后，取肿瘤组织及脑组织制成细胞悬液行荧光分光光度分析，探讨血脑屏障的破坏情况。取29只荷瘤大鼠，分成开骨窗组、开骨窗加取瘤组及对照组，观察生存期。结果： 用本法建立近皮层C6胶质瘤模型54只，52只成功建立模型，成功率96.3%。病理、流式细胞、免疫组织化学显示大鼠C6胶质瘤生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似；对照组、开骨窗组及开骨窗加肿瘤切除组生存期分别为（32.000 0±8.981 5）、（41.888 9±6.461 8）、（59.400 0±14.416 0） d。行组间单向方差分析，生存期比较有统计学差异（P<0.05）。结论： 该方法建立的胶质瘤模型稳定，生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似，便于开骨窗及切除肿瘤，是进行胶质瘤研究的较好模型。
【关键词】 近皮层 C6胶质瘤 骨窗 大鼠
胶质瘤大鼠模型仍是目前研究胶质瘤的较好模型。许多学者将C6胶质瘤细胞接种于大鼠的尾状核区，建立颅内荷瘤鼠模型。目前这一方法已相当成熟［13］，缺点是接种的肿瘤位置深在，行手术切除或行热疗、光动力治疗研究时肿瘤显露比较困难。体外细胞实验及皮下荷瘤鼠模型虽然建模简单，但无法准确模拟颅内特殊的病理生理状况特别是血脑屏障的影响。本实验的目的是建立一种便于开骨窗及肿瘤切除的大鼠胶质瘤模型，为研究胶质瘤提供一种选择。
1 材料和方法
1.1 材料
C6细胞株：购自中国科学院上海细胞研究所。SD大鼠54只，雄性，质量260 310 g，购自东南大学医学院实验动物中心。5ALA购自Sigma公司。RMPI 1640为GIBCOL公司产品，胎牛血清购自杭州四季青公司。1.5Tesla MR (东南大学附属中大医院提供使用) ，江湾Ⅰ型C动物立体定向仪及F2500荧光分光光度计（南京航空航天大学提供使用），BD公司产FACScalibur流式细胞仪（南京大学开放实验室）。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养及动物模型建立 C6细胞常规培养于含10％胎牛血清、青霉素G（100 IU·ml-1）、链霉素（50 μg·ml-1）的RMPI 1640培养基中。培养条件：100 ml培养瓶置于 37 ℃、5％CO2培养箱中，每1 2天换液1次。将处于对数生长期的细胞消化、离心后，用不含血清的RMPI 1640培养基吹打后计数，再次离心洗涤去血清及胰酶后加入不含血清的RMPI 1640（含琼脂糖15 mg·ml-1）制成细胞悬液，调整细胞浓度为1×104μl-1。大鼠采用4％戊巴比妥钠（1 ml·kg-1）经腹腔麻醉，立体定向仪固定，常规消毒、铺巾、切开，暴露前囟，用牙科钻于中线右3.5 mm、冠状缝后1 mm处钻孔。用25 μl微量注射器将上述细胞悬液10 μl，距离颅骨表面进针3.5 mm,退针0.5 mm,待细胞沉淀充分后注射。注射速度为1
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