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培养大鼠脑皮层神经元损伤后c

王克万 杨志焕 王正国 朱佩芳 包新民 舒斯云 陈长才

  【摘要】 目的 观察培养的大鼠皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达,探讨其在继发性脑损伤中的作用。方法 混合培养10~12天SD胎鼠的皮层神经元分别用谷氨酸和机械划痕损伤。采用SP法进行免疫组化双重标记反应。结果 谷氨酸作用后2小时,c-fos蛋白开始表达,4小时后在核中明显浓聚。创伤后2小时仅在创道边缘直接损伤部位有c-fos蛋白表达,远离创道未直接损伤区的神经元在创伤后4小时才出现;少数神经元突起远端有明显c-fos蛋白颗粒;损伤后6小时神经元突起开始崩解,但c-fos蛋白颗粒仍未消失。结论 谷氨酸损伤可引起培养的神经元c-fos蛋白的大量表达,损伤后培养皮层神经元和胶质细胞可以释放出神经毒性物质,培养神经元损伤后c-fos蛋白过度表达可能与凋亡有关。
  【关键词】 c-fos蛋白 神经元培养 谷氨酸 继发性脑损伤

Expression of c-fos Protein After Cultured Cortical Neuron Injury in Rats  WANG Ke-wan, YANG Zhi-huan, WANG Zheng-guo, et al. Research Institute of Surgery, Third Military Medical University, Chongqing 400042
  【Abstract】 Aim To observe the expression of c-fos protein in cultured cortical neurons subject to either glutamate or mechanical injury in rats, and to study the effect of c-fos protein on brain injury. Methods Mixed cultured cortical neurons from SD rats were injured by either glutamate or mechanical force, then the expression of c-fos protein was studied with double-labeled immunohistochemistry. Results Two hours after glutamate injury, the expression of c-fos protein began in the nuclei and 4 hours later it reached peak, and c-fos protein only expressed in the direct injured area at the edge of traumatic tracts after 2 hours and began to express till 4 hours in the indirect injured area far from traumatic tracts. The positive immunoreaction of c-fos protein granule remained. Conclusion The c-fos protein expression can be induced by glutamate. Neurotoxic substances were produced in cultured medium after traumatic injury, and c-fos expression may be associated with neuron apoptosis.
  【Key words】 c-fos protein Culture neuron Glutamate Secondary brain injury

  颅脑损伤和脑缺血等应激因素可诱使c-fos原癌基因在神经元中瞬间表达,为细胞代谢活动变化的标志。由于基因的表达产物c-fos蛋白可能参与细胞内信号转导,其在继发性脑损伤中的作用近年来引起人们的普遍关注。笔者利用体外培养神经元损伤模型和免疫组化双重标记技术,动态地观察c-fos蛋白在体外培养大鼠皮层神经元中损伤后的表达,并探讨其在继发性脑损伤中的作用。

材料与方法
  一、混合培养胎鼠大脑皮层神经元方法
  根据Banker等[1]的方法并

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