r than that in group B (P<0.01) , while in group E, NO content significantly increased (P<0.01). Conclusions： Ozone with concentrations of 20～40 μg/ml can promote articular cartilage repair in experimental OA, and its mechanism may relate to inhibiting NO generation. Ozone of 60 μg/ml has not repairing effect to cartilage.
[Key words] osteoarthritis; ozone; cartilage, articular; nitric oxide; rabbits
骨性关节炎(osteoarthritis OA)是一种慢性进行性关节炎症，随人口老龄化，OA发病率呈逐年上升趋势，严重影响了老年人健康及生活质量。由于OA发病机制目前还不十分清楚，虽然治疗方法很多，但各种疗法均有其局限性，不能从根本上治愈OA[1]。大量研究表明，一氧化氮(NO)可能是导致关节软骨退变的病因之一，而臭氧治疗是近年引进国内的一种方法，对OA的临床疗效满意[2]，但其作用机制尚不十分清楚。2008-2009年通过对臭氧治疗实验性OA后关节冲洗液中NO含量检测，探讨臭氧的作用机制，为臭氧在临床广泛、合理应用寻找理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
选用8～14月龄、体重2.5 kg成年新西兰兔40只(雌雄不限)，由贵阳医学院实验动物中心提供。将动物随机分为5组，每组8只，正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、臭氧20 mg/L治疗组(C组)、臭氧40 mg/L治疗组(D组)及臭氧60 mg/L治疗组(E组)。
1.2 仪器及试剂
德国HAB，IIaB型臭氧发生仪，NO药盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3 方法
1.3.1 骨性关节炎模型复制
除正常对照组不造模外，其余4组采用Vandman[3]法将实验动物左膝关节用石膏固定于伸直位,固定范围从兔踝关节下3 cm至腹股沟以下1.5 cm，踝背屈30°～40°，固定时间6周。单笼饲养，不定时强迫家兔运动。
1.3.2 臭氧治疗
造模6周后拆除石膏，将左膝剃毛消毒后，C、D、E组分别取1 ml相应浓度臭氧注入关节腔组，A组及B组则注射1 ml空气，每3天1次，连续两次，第二次给药后72 h用空气栓塞法处死家兔。
1.3.3 关节冲洗液NO含量检测
于第二次臭氧治疗后48 h、用毕胜等[4]采集关节腔冲洗液的方法收集关节冲洗液，平均回收量0.8 ml，置于-20 ℃低温冰箱中保存待测;用硝酸还原酶法检测家兔关节冲洗液中NO含量。
1.3.4 病理检查
取左膝关节胫骨平台全层软骨组织制成0.3 cm×1 cm×0.2 cm薄片，A.F液固定12～24 h，5%硝酸溶液脱钙3 d后放入5%明矾中12 h，流水冲洗12 h，石腊包埋切片，参照C.Colombo关节软骨病理评分标准[5]行病理积分统计。
1.4 统计学处理
采用SPSS 11.5软件进行统计处理，计量资料以(x±s)表示。组间比较采用方差分析和q检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 病理变化
A组关节软骨外观呈蓝白色，色泽明亮，无裂纹及软化，关节内少许清亮滑液;光镜下关节软骨四层结构清晰可辨，软骨细胞排列整齐，潮线完整;B组软骨表面碎裂，软骨细胞增生，软骨面见裂隙及软骨硬化;C、D组关节软骨病变较B组明显减轻，而E组与B组相似(见图1)。各组病理积分统计(表1)结果显示，B组病理积分较A组明显升高(P<0.01);C、D组与B组相比，病理积分显著降低(P<0.01，P<0.05)，E组与B组病理积分比较无差异(P>0.05)。表1 各组家兔关节软骨病理积分及关节冲洗液中NO含量(略)
2.2 关节冲洗液中NO 含量
见表1。与A组相比，B组NO 含量显著增高(P<0.01);与B组相比，C、D组NO 含量显著降低(P<0.01)
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