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顺铂 维拉帕米和环孢菌素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究 |
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enhanced apoptosis of COC1/DDP cells induced by DDP. Conclusions VP and SDZ PSC833 increase sensitivity of the cell lines to DDP. SDZ PSC833 enhances apoptosis induced by DDP.Induction of apoptosis is one of the pharmaceutical mechanisms of DDP, and acquired drug resistance is associated with resistance to apoptosis. The most prominent effect of DDP on cell cycle kinetics is a slowdown in S-phase transit and apoptotic cells are at S-phase.
Key words：Ovarian neoplasms; Apoptosis; Drug resistance; Cisplatin; Rerapamil▲
细胞凋亡是一种生化和形态特征明确的细胞死亡方式。对许多肿瘤的研究表明，细胞凋亡是一种化学治疗（化疗）后普遍存在和至关重要的细胞死亡方式。顺铂（DDP）是卵巢癌化疗常用药物，近年来，大量的资料显示，癌细胞对顺铂的敏感性与细胞凋亡有关，顺铂可诱导卵巢癌细胞发生凋亡。研究顺铂的一些增敏剂发现，增敏剂也与细胞凋亡有关。本研究以卵巢癌亲代细胞株COC1、获得性耐药株COC1/DDP为实验对象，初步探讨顺铂、维拉帕米(Verapamil,VP)及3′-酮基-去甲基苏氨酸1-缬氨酸2-环孢菌素(PSC833)与卵巢癌细胞凋亡的关系及其作用机理。
资料和方法
一、材料
1.细胞株：COC1由中国医学科学院肿瘤研究所建株；COC1/DDP由湖北医科大学肿瘤研究所建株,耐药倍数为亲代的6.5倍［1］。
2.主要药品：顺铂为中国齐鲁制药厂产品；PSC833为瑞士Sandoz公司产品；VP、低溶点琼脂糖、溴乙锭为美国Sigma公司产品。
二、方法
1.细胞培养：COC1、COC1/DDP细胞用RPMI-1640培养液培养，当细胞数增至1×106/ml时分组加药进行试验，24h后检测。具体步骤如下：在96孔微培养板内，每孔加5×104个细胞培养30min，3个孔为1组。根据所加药物的不同分为，(1)DDP组（0.13、0.25、0.50、1.00、2.00μg/ml）；(2)VP组（0.38、0.75、1.50、3.00μg/ml）；(3)PSC833组（0.15、0.30、0.60、1.20μg/ml）；(4)DDP(0.13～2.00μg/ml)联合VP(3.00μg/ml)组；(5)DDP(0.13～2.00μg/ml)联合PSC833（0.30μg/ml)组；(6)对照组（生理盐水）。
2.细胞生长检测：将各组细胞培养24h后，加入等量0.2％台盼蓝染色，镜下计数活细胞，重复3次，计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率(R)＝［（对照组活细胞-实验组活细胞）／对照组活细胞］×100％。q值［3］计算公式为:q＝（RDDP＋RVP或PSC833）/［RDDP＋（1-RDDP）.RVP或PSC833］。q＞1为协同作用，q<1为拮抗作用。
3.细胞周期分析：采用流式细胞仪（美国BC公司生产的FACS420型）进行细胞周期分析。将各组细胞样品置-20℃，70％乙醇固定，常规预处理后进行细胞周期检测［8］，各组测10000个细胞。细胞周期计算，应用细胞周期拟合软件(ModfitLT软件)进行。
4.凋亡细胞检测：采用“慧星”分析(Comet分析)［4］方法检测。将各组单细胞悬液与1％低溶点琼脂糖混合成浓度为0.75％的细胞混合液,迅速冷却制成胶冻玻片,碱性溶解、解旋;用低压短时碱性电泳，溴乙锭染色；分别用光学显微镜、电子显微镜、荧光显微镜(日本Olympus公司生产HB-Ⅱ型)和流式细胞仪观察凋亡细胞。判断标准：（1）光学显微镜下，见凋亡细胞体积缩小、细胞浆浓缩、核染色质密度增高、核边聚、核碎裂、细胞膜出现皱褶伴有出泡现象；（2）电子显微镜下，见凋亡细胞核浓缩、边聚，细胞浆内可见完整的细胞器；（3）荧光显微上一页 [1] [2] [3] 下一页
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