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雌激素与孕激素对卵巢癌耐药细胞系OVCAR |
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xorubin resistance of OVCAR-3 cell line and their inhibition were more obvious than that of verapamil, which suggested that E2 and MPA may be used clinically for adjuvant chemotherapy.
【Key words】 Estrogens Medroxyprogesterone Ovarian neoplasms Tumor cell, culturedDrug resistance neoplasm
肿瘤细胞减灭术及术后化学治疗（化疗），是目前治疗卵巢癌的主要手段，但化疗的耐药问题严重影响了化疗的效果。近年来研究认为，多药耐药基因MDR1及其编码的P-糖蛋白介导的多药耐药，是化疗耐药的主要机理之一，并发现一些药物如异搏定、奎尼丁、环孢霉素A等，可逆转其介导的多药耐药［1］ 。但这些药物的毒副作用较大，限制了临床应用。又有研究发现，孕酮可逆转P-糖蛋白介导的耐药，且其作用强于异搏定［2］。OVCAR-3卵巢癌细胞系是体外培养的对顺铂、阿霉素（ADM）、环磷酰胺等多种药物耐药的多药耐药细胞系。本研究对雌、孕激素对OVCAR-3细胞生长的影响，及能否逆转OVCAR-3细胞对ADM的耐药，进行了初步的探讨。
材料和方法
一、材料
苯甲酸雌二醇（E2）、安宫黄体酮（MPA）、盐酸维拉帕米(异搏定)均为化学对照品，来自中国药品生物制品检定所；ADM为汕头明治医药有限公司产品；四甲基偶氮唑蓝(MTT)为德国Serva公司产品；OVCAR-3细胞自美国标准细胞库引进。
二、 方法
1.细胞的制备：OVCAR-3细胞在培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养基)中培养至对数生长期，消化、过滤制成单细胞悬液，稀释至3×105个细胞/ml，混匀后加入96孔细胞培养板，每孔100 μl，于37℃、5%二氧化碳培养箱培养18小时，吸弃上清液。
2.分组及细胞培养：将96孔培养板按列分组，每组8孔，第一组不加细胞，作为空白对照；一组为对照组，每孔加入不含药培养液200 μl。其余各组为实验组，每孔分别加入200 μl新鲜配制的不同浓度（即终浓度分别为0.01 μmol/L、 0.10 μmol/L、1.00 μmol/L、 10.00 μmol/L、50.00 μmol/L、100.00 μmol/L）的含药（E2、MPA、E2＋MPA）培养液（研究对耐药的影响时，每组均加入终浓度为10.00 μmol/L的ADM，包括对照组）。继续培养48小时，每孔加入MTT溶液(5 mg/ml)20 μl，再培养4小时；吸弃上清液，每孔加入二甲基亚砜溶液200 μl (包括空白对照孔)，混匀，使之彻底溶解，于30分钟内，以酶标仪测波长为600 nm处的吸光度值（以空白对照孔为零）。
3．细胞生存率：细胞生存率＝(实验组吸光度平均值/对照组吸光度平均值)×100％（以对照组生存率为100％）；或细胞生存率＝［实验组吸光度平均值/（对照组吸光度平均值÷50％)］×100％（研究对耐药的影响时，以对照组即只加ADM的生存率为50％，因预试验测得ADM浓度为10μmol/L时细胞生存率约50％）。
三、 统计学处理
本研究结果采用Gpis 1.12统计软件，计算各组吸光度(±s)与对照组两两进行t检验。以Microsoft excel 97软件制图。
结果
一、 雌、孕激素对OVCAR-3细胞生长的作用
1. E2对OVCAR-3细胞生长的作用: E2浓度为0.01～1.00μmol/L时，OVCAR-3细胞生存率为101.0%～102.5%，与对照组生存率100.0%比较，差异无显著性 (P>0.05)。E2浓度10.00～100.00 μmol/L时，OVCAR-3细胞生存率为87.5%～65.9%,细胞生长受到抑制，与对照组比较，差异有显著性(P<0.05及P<0.01)。见表1。
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