CCCACCGAACTCAAAGAAGG-3’，预计扩增片段长度为129 bp；Bax-sense： 5’-ATGGGCTGGACACTGGACTTC-3’，Bax-antisense：5’- GAGCGAGGCGGTGAGGAC-3’，预计扩增片段长度为146 bp；caspase-3-sense：5’-GGAACGAACGGACCTGTG-3’，caspase-3- antisense：5’-GCCTCCACTGGTATCTTCTG-3’，预计扩增片段长度为188 bp；β-actin-sense：5’-CGTTGACATCCGTAAAGACC-3’，β-actin-antisense：5’-TAGAGCCACCAA TCCACAC-3’，预计扩增片段长度为176 bp。设定PCR反应程序：95 ℃ 5 min 预变性，94 ℃ 20 s，62 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，循环40次。 1.5 数据处理及统计学分析 Real-time PCR的结果以Ct值表示， 即PCR反应指数增长初期荧光信号跨越阈值时的反应循环数。相对定量采用比较Ct法， 根据等式Fold = 2-△△Ct来计算处理组和对照组之间目的基因的相对表达差异[10]，其中△Ct值代表同一样本中目的基因和管家基因的Ct值差异，而△△Ct值表示处理组和对照组间的△Ct值差异，计算结果以两组间目的基因拷贝数的比值，即Fold值来表示。本实验数据都用均数±标准差表示，采用SPSS 11.0统计软件中方差分析进行数据的处理和比较，以P<0.05表示差异具有统计学显著意义。
2 结 果
2.1 IL-6预防NMDA诱导的Bcl-2 mRNA表达抑制 CGNs用IL-6（40 ng/ml）预处理8 d后，用NMDA（100 μmol/L）刺激30 min，然后用Real-time PCR法检测神经元内Bcl-2 mRNA的表达水平。结果显示，未用IL-6预处理的神经元，在用NMDA刺激后，其表达Bcl-2 mRNA显著少于未用任何处理的对照组（图1）；单独用IL-6预处理神经元后，未改变其中Bcl-2 mRNA的表达（图1）；神经元用IL-6预处理，然后用NMDA刺激，其B
cl-2 mRNA的表达高于未用IL-6预处理的神经元（图1），说明IL-6可预防NMDA诱导的神经元Bcl-2 mRNA表达抑制。 2.2 IL-6拮抗NMDA诱导的Bax mRNA表达增加 与未用任何处理的神经元相比，NMDA显著加强Bax mRNA的表达（图2）。单纯IL-6对神经元的Bax mRNA表达无抑制作用（图2）。神经元用IL-6预处理后再用NMDA刺激，其表达Bax mRNA水平显著低于未用IL-6预处理的NMDA刺激组（图2）。
2.3 IL-6抑制NMDA诱导的神经元内caspase-3 mRNA表达增加 结果如图3所示，与未用任何处理的神经元比较，NMDA显著加强caspase-3 mRNA的表达；IL-6单独处理对神经元的caspase-3 mRNA表达无明显抑制作用；NMDA刺激已用上述IL-6预处理的神经元后，神经元表达的caspase-3 mRNA水平明显低于未用IL-6预处理的神经元，已接近对照水平（图3）。
3 讨 论
正常情况下细胞凋亡是一种生理性调节机制，神经细胞凋亡被认为是维持神经系统生长发育动态平衡的必要手段，但在病理因素干扰下，如兴奋性氨基酸毒性导致细胞内钙水平升高，在众多基因的参与下，细胞凋亡异常，则会导致许多疾病的发生。体内外实验证明谷氨酸的兴奋性毒性主要是通过激活NM
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