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豆蔻酰佛波醇乙酯与 |
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or cell lines. The synergistic effect of PMA combined with IFN-γ in the induction of B7-1 expression can be anatagonised by H7 ［1-(5-isoquinolinesulfonyl)-2-methyl-Piperazine dihydrochloride］. In addition, treatment with PMA combined with IFN-γ simultaneously induced or enhanced the expression of MHC class Ⅰ/Ⅱ on these tumor cell lines. The tumor cells treated by PMA combined with IFN-γ were able to induce CTL killing activity and T cell proliferation, which is involved in the expression of B7-1. Conclusions The enhancement or induction of B7-1 expression by IFN-γ may be dependent on the prior activation of protein kinase by PMA and the induced B7-1 expression on tumor cells may have some therapeutic potential.
【Key words】 Interferon type Ⅱ Antigens, CD80 T-lymphocytes Lymphocyte transformationPhorbol myristale acetate
T淋巴细胞是人体抗肿瘤的主要免疫细胞，它的活化除需要组织相容抗原（MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ）递呈的特异性肿瘤抗原外，还需要共同刺激信号。免疫球蛋白超家族糖蛋白的共刺激分子B7-1在激活T淋巴细胞免疫过程中是传递关键性共同刺激信号的分子［1-4］。我们以前的研究也表明，转染 B7-1基因的肿瘤细胞能有效地激活 T淋巴细胞介导的抗肿瘤免疫反应［5］。
本研究观察了豆蔻酰佛波醇乙酯（phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA)和γ-干扰素(interferon-γ，γ-IFN)诱导B7-1和其他免疫分子在卵巢癌细胞及其他肿瘤细胞上的表达情况，探讨应用PMA和γ-IFN在肿瘤免疫效应中的意义。
材料和方法
一、材料
1.肿瘤细胞株：卵巢粘液性囊腺癌细胞株(MCAS)、伯基特淋巴瘤细胞株(Raji)、急性T淋巴细胞白血病细胞株( Molt-4)，由日本癌学会细胞库提供。卵巢浆液性囊腺癌细胞株（LM-1）、及转染B7-1基因的MCAS细胞株，由日本京都大学放射线生物研究中心建立。
2.其他试剂：γ-IFN购于美国Mallinckrodt公司，蛋白激酶 C (PKC)、PMA 和1-(5-磺酰基)-异喹啉-2-甲基-哌嗪盐酸盐( H7 )等购于美国Sigma公司。
二、方法
1.T淋巴细胞的制备：取卵巢癌患者及健康人外周血，用肝素抗凝，集蔗糖梯度离心法分离，得到富含淋巴细胞的单个核细胞，经覆盖有血清的塑料平板吸附和尼龙网柱去除单核细胞和B淋巴细胞，得到的游离淋巴细胞，用 30%和 40%的硅化聚乙酰胺吡咯烷酮行非连续的梯度离心后，即得到静止T淋巴细胞。
2.细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备：预先用PMA (50 nmol/L)处理24小时，再加入γ -IFN (100 U/ml)处理 24小时的卵巢癌细胞，或未经处理的卵巢癌细胞，经丝裂霉素（ 50μg/ml)处理1小时灭活。将1×105个灭活后的卵巢癌细胞与1×106个T淋巴细胞加在1 ml含有10% 小牛血清 (FCS)的RPMI-1640培养液中，接种于24孔平底组织培养板内。阻断实验用抗B7-1单抗 ( 5μg/ml)和对照抗体抗CD7单抗进行。培养6天之后，得到扩增的 CTL。
3.T淋巴细胞杀伤活性的计算方法：用标准4小时51铬(51Cr)释放试验分析，详见参考文献［6-7］。
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