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补肾健脾中药对哮喘模型大鼠肺组织 |
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熟地、巴戟天、肉苁蓉和鹿角片等11味中药组成，制成浓度为3490g/L的水煎液；加味六君子汤由黄芪、人参、白术和甘草等9味药组成，制成浓度为2010g/L的水煎液。以上中药均由上海药材公司提供。
1.3 动物 雄性SD大鼠，体重200g左右，由上海计划生育研究所提供。
1.4 大鼠哮喘模型制备 参照吕国平等人的方法［1］略加改动。先将动物随机分为正常对照组、模型组、龟芪散组、必可酮组及龟芪散加必可酮组，观察24h。然后，除正常对照组外，其余各组再分第1、3、7天组，腹腔注射卵蛋白100mg，灭活百日咳杆菌疫苗5×109个和氢氧化铝干粉100mg致敏，2周后予超声雾化吸入1%卵蛋白激发。每天上午8～9时吸入20min重复激发。正常对照组用生理盐水代替抗原液进行注射和雾化吸入。各组在相应预定时间处死，摘取肺脏。
1.5 给药方法 龟芪散在哮喘激发前2周开始给药，含药物饲料吃净，补加普通饲料，直至动物处死为止，每鼠服用剂量为2.4g/d；补肾定喘汤和加味六君子汤每鼠服用剂量分别为3mL/d，哮喘激发前2周开始给药，哮喘激发期间继续给药，直至实验结束。必可酮在每日激发哮喘的同时予以每鼠喷雾吸入0.1mg/d，对照组吸入等容积生理盐水。
1.6 肺组织测定 肺组织放入加蔗糖缓冲液中，以细胞分散器粉碎，然后以teflon匀浆器匀浆，27000g离心15min，取沉淀以反应缓冲液配成所需浓度的膜蛋白悬液。反应试管中加入125I-心得静50μL和膜蛋白悬液200μL，平行非特异管另加入100μL心得安，总容积为400μL。以上操作均在0～4℃中进行。37℃水浴中反应30min后，收集结合部分于玻璃纤维滤膜上，以放射免疫γ计数器测量放射性。再以公式算出结合位点数(RT)，结合位点数=(总结合-非特异性结合)/［仪器效率×比活度×蛋白量(mg)］［2］。
1.7 蛋白含量测定 用 Lowry 微量定蛋白法［2］。
2 结果
2.1 补肾健脾中药对哮喘大鼠肺组织-AR的RT值的影响
上表显示，哮喘激发第1天，除必可酮组外，各组大鼠肺组织β-AR的RT值相比较无明显差异。哮喘激发第3天，模型组β-AR的RT值和正常对照组β-AR的RT值相比较下降明显(P＜0.05)。各用药组与模型组比较，无明显差异。哮喘激发第7天，哮喘模型组β-AR的RT值显著下降，与正常对照组β-AR的RT值相比较P＜0.01，有非常显著性意义。各用药组与模型组比较，有显著性差异。各用药组组间β-AR的RT值无明显差异。提示扶正三方均可上调哮喘大鼠肺组织β-AR的RT值。
表 1 补肾健脾中药对哮喘大鼠肺组织β -AR 的 RT 值的影响 (±s)
组 别 N/只 每 g 蛋白结合位点数 (RT)/pmol)
第 1 天 第 3 天 第 7 天
正常对照组 9 144.2±25.1 144.2±25.1 144.2±25.1
哮喘模型组 9 131.4±24.8 91.3±26.2△ 41.3±12.8△△
必可酮组 9 160.7±18.6* 90.4±20.5 68.8±14.2**
龟芪散组 9 123.6±20.5 102.5±22.4 73.2±17.6**
龟芪散+必可酮组 9 147.8±18.3 99.2±25.2 71.3±18.2**
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