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连红愈创灵中连翘甙含量测定 |
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刘爱华 张 玲 单卫华 时延增 孙茂丽 李春玲
提要 采用双波长薄层扫描法测定了连红愈创灵中连翘甙的含量，方法简便、快速，具有较好的准确性和精密度。
关键词 连红愈创灵； 连翘； 连翘甙； 薄层扫描法
连红愈创灵为中药外用搽剂，是由连翘、红花、牡丹皮、肉桂等组方而成，具有清热解毒、活血散瘀、消肿止痛、祛腐生肌之功效。临床上主治创伤肿痛、疖肿、慢性疮疡等证，具有较好的疗效。组方中，连翘为君药，其有效成分连翘甙具有较强的抑菌作用，并能抑制CAMP、磷酸二酯酶的活性［1］。为保证制剂质量，采用薄层扫描法，进行了连翘甙测定方法的研究，方法简便、快速、灵敏度高。可作为该制剂的质控标准。
1 仪器与试药
CS-9301薄层扫描仪(日本岛津公司)；PBQ-I型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)；定量毛细管(美国Drummond厂)。连翘甙对照品(中国药品生物制品检定所)。连翘药材购自济南市药材站(经山东省中医药研究所生药室彭广芳研究员鉴定，药材符合《中国药典》规定)；所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品供试液及对照品溶液的制备
2.1.1 样品供试液的制备：精密吸取样品液5 ml，加氯仿提取4次，5 ml/次。合并提取液，加水洗涤3次，10 ml/次。弃去水液，置水浴上挥去溶剂，残渣加甲醇溶解，并定容至1 ml，作为样品供试液。
2.1.2 对照品溶液的制备：精密称取连翘甙对照品2 mg，加甲醇溶解，转移至2 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用。
2.1.3 阴性对照液的制备：将处方中除去连翘，余药按处方比例及制备工艺制成阴性对照样品液，按样品供试液制备方法制成阴性对照液。
2.1.4 对照药材溶液：精称连翘青翘和老翘药材各1 g，加甲醇20 ml，回流提取1 h，过滤，滤液回收甲醇，残渣以甲醇溶解，并定容至1 ml，作为不同对照药材溶液。
2.2 层析条件
硅胶G薄层板：取硅胶G，加入适量0.2%的CMC-Na，自动铺板器铺成0.5 mm的薄层板，晾干，于105℃活化1 h，置干燥器中备用。
展开剂：氯仿－甲醇－冰醋酸(85∶12∶0.5)。
显色剂：实验中发现连翘药材及连翘甙对照品选用硅胶GF254在波长254 nm显深蓝色斑点［1］，分离效果较好，但在样品液中，其他成分干扰很大。后改用5%香兰素浓硫酸显色，连翘甙显鲜紫色斑点，其他成分没有干扰，故采用5%香兰素浓硫酸显色。
2.3 薄层层析：精密吸取上述样品供试液，对照药材溶液各2 μl，对照品溶液1.2 μl，点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开10 cm，晾干，显色，105℃烘至斑点显色清晰，连翘甙与其他成分斑点得到很好的分离，Rf值为0.45。薄层图谱见图1。
图1 连翘甙对照品及样品供试液TLC图
1.连翘甙对照品
2.样品供试液
3.阴性对照液
2.4 仪器扫描条件：测定波长 λs=540 nm，参比波长 λR=700 nm，反射性锯齿形扫描，线性参数 Sx=3，狭缝1.2 mm×1.2 mm，扫描速度20 mm/min。
2.5 稳定性试验：精密吸取对照品溶液点于同一硅胶G薄层板上，层离，挥干溶剂，显色，上面覆盖一块相同面积的玻璃板，固定，立即扫描，再每隔20 min扫描1次，结果表明连翘甙斑点在1 h内稳定。
2.6 精密度试验：同一斑点连续扫描5次，测得 RSD=0.88%；同一薄层板上5个相同量的各对照品斑点，测得面积，计算RSD=1.79%；测定5块不同薄层板相同量的对照品斑点，其 RSD=2.74%，具有较好的精密度。
2.7 标准曲线的绘制：精密吸取连翘甙对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μl，分别点于薄层板上，按上述条件层离扫描，以点样量为横坐标，测得斑点峰面积值为纵坐标，作图。回归方程 Y=1047.3 X－57.5， γ=0.9998。结果表明连翘甙点样量在1～5 μg范围内与其峰面积值呈线性关系。
2.8 样品测定：按上述方法测得样品供试液和青翘、老翘药材中连翘甙含量见表1。
表1 样品供试液及青翘、老翘药材中连翘甙含量
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