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不同转染方法对逆转录病毒转染效率影响的研究 |
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【摘要】 目的 探讨不同加样方法对逆转录病毒转染软骨细胞效率的影响。方法 将构建并包装好的逆转录病毒重组基因PLNCX2IL1RaGFP分别采用以下加样转染方法进行转染并作对照研究，a)第1组：先加病毒上清，6 h后补充培养液；b)第2组：先加病毒上清，隔夜补充培养液；c)第3组：先加病毒上清，6 h后更换成培养液，隔夜培养后弃液，重复先加病毒上清，6 h后更换成培养液；d)第4组：先加病毒上清，6 h后补充培养液，隔夜培养后弃液，重复先加病毒上清，6 h后补充培养液；e)第5组：经典转染法，同时加病毒上清液和培养液。转染2 d后免疫荧光显微镜下观察荧光显色，4周稳定转染后分别检测各组细胞培养液中NO含量，并用ELISA法检测上清液中hIL1Ra的表达情况。结果 酶切鉴定重组基因正确；免疫荧光显微镜观察可见绿色荧光显色；1～5组NO含量以第4组为最高，第5组为最低；ELISA检测1～5组培养液中hIL1Ra的含量以第4组为最高，第5组为最低。结论 四种不同加样转染方法的转染效率均高于经典法，其中以第4组为最好。
【关键词】 转染方法；逆转录病毒；转染效率
Experiment Study of Retrovirus Transfected Efficience with Several Addingsample Methods
LIU Jun，XIANG Chuan，WEI Xiaochun
(Second hospital of Shanxi Medical University，030001，Taiyuan，Shanxi，China)
Abstract：Objective To study effect of retrovirus transfected efficience on articular chondrocytes with several addingsample methods.Methods With following adding.methods，using constructed and packaged retrovirus carrier PLNCX2IL1RaGFP transfect articular chondrocytes，and making control study.1，adding virus supernatant，culture medium was complemented after 6 hours.2，adding virus supernatant firstly，complementing culture medium on the second day.3，adding virus supernatant，replaceing the virus supernatant with culture medium after 6 hours，quiting medium after culturing overnight，and then adding virus supernatant，replaceing the virus supernatant with&nbs[1] [2] [3] [4] [5] 下一页
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