茄根茎中有效成分芦丁的再利用研究

　　1.3 动物和试剂雄性断乳Wistar大鼠，体重50～60 g，购于吉林大学基础医学院动物部。高脂饲料(每千克基础饲料中加猪油80 g, 鸡蛋10个，胆固醇6g)。胆固醇，天津市光复精细化工研究所，批号为20051125。受试药物，黑色颗粒，纯度35%。

         2 方法与结果

　　2.1 色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-1%冰醋酸(32∶68)为流动相，检测波长为257 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃，进样量为20 μl[3，4]。

　　2.2 提取与分离茄根粗粉1 000 g加水，在搅拌下加入石灰乳，调至pH8～9，加热煎煮两次，时间分别是1.5 h和1 h，趁热过滤，得滤液。滤液在60～70℃下用浓HCl调至pH 4～5，静止过夜，离心，得褐色沉淀A1(28 g)。褐色沉淀溶于水，通过大孔树脂色谱柱，分别用水、30%，50%，75%，95%乙醇梯度洗脱，合并75%洗脱液，减压浓缩，干燥得黄色粗品1.1 g，将此粗品溶于水中，先用乙醚萃取，再用醋酸乙酯萃取，蒸干醋酸乙酯萃取液，用制备薄层纯化[展开剂为：醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水(13∶5∶5∶3)]，得黄色粉末B1 85 mg。茄茎用同样方法处理得褐色沉淀A2(36 g)、黄色粉末B2144 mg。

　　2.3 芦丁的鉴定

　　2.3.1 物理性质所得黄色粉末测得mp.为174～178℃，易溶于热水、稀碱液和甲(乙)醇，在酸水溶液中析出黄色沉淀，难溶于三氯甲烷、石油醚等极性小的有机溶剂，微溶于丙酮和醋酸乙酯等有机溶剂。

　　2.3.2 化学检识取样品1 mg置于试管中，加乙醇2ml溶解，在水浴上小心加热溶解，滴加浓盐酸2～3滴，再加少许镁粉，溶液由黄色变为樱红色，说明该样品为黄酮类化合物。

　　取样品少许，加水溶解后，加入α-萘酚混匀后，沿试管壁滴加浓硫酸，界面出现棕色环，说明样品中含有糖或苷(芦丁)。纸上显色反应：日光下呈黄色斑点，紫外灯下为棕色，示为无游离3-OH的黄酮类化合物。

　　FeCl3反应呈深褐色，说明含有酚羟基;中性醋酸铅反应产生肉红色沉淀，AlCl3反应呈鲜黄色，示有邻二酚羟基。

　　取样品溶液1 ml，然后滴加2%ZrOCl2 的甲醇溶液，溶液颜色呈鲜黄色，说明可能有C3-OH或C5-OH，再继续向试管中加入2%柠檬酸的甲醇溶液，样品溶液黄色褪去，示无C3-OH，但有C5-OH。进一步证明该样品为含有5-OH。

　　2.3.3 芦丁的纸色谱检识分别取样品B1和B2少许，乙醇溶解，按照下列条件进行纸色谱鉴定，并与标准品对照，记载Rf值进行比较。展开剂：正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)上层。显色剂：氨气熏。结果表明，样品和芦丁标准品均呈棕色斑点，而且Rf值一致，说明为同一成分。

　　2.3.4 光谱鉴定UV(MeOH)nm:257,265sh,298sh,359。

　　2.4 含量测定

　　2.4.1 对照品溶液的制备精密称取在120℃减压至恒重的芦丁对照品1.230 0 mg，加甲醇溶解稀释至10 ml溶液[5]。

　　2.4.2 供试品溶液的制备A1和A2样品溶液的制备：分别精密称定A1和A2细粉各约0.5g，精密加甲醇25 ml，称定重量，超声处理(功率100 W，40 kHz)40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液经0.45μm滤膜(上海兴亚净化材料厂)过滤后备用。

　　B1和B2样品溶液的制备：合并B1和B2，精密称定细粉约1 mg，加甲醇溶解稀释至10 ml溶液。

　　2.4.3 线性关系考察精密称取芦丁对照品11.42 mg于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀。取此溶液适量加甲醇配成5，10，25，50，100，150，300 μg·ml-1溶液，进样量20 μl，按“2.1”项色谱条件，以峰面积S对浓度C进行线性回归，得工作方程Y=22.729X-0.004(r=0.999 5)，在5～300 μg·ml-1范围内，峰面积与芦丁浓度呈良好线性关系[6]。

　　2.4.4 最低检测限按信噪比>2计算，本方法对芦丁的最低检测浓度为0.5 μg·m

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