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脊髓减压术后神经功能恢复机理的实验研究 |
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丝垂直旋入该孔。通过计算残留在椎板外的螺纹数控制螺丝进入椎管内的深度。造成该段脊髓50％压迫（根据脊髓的前后径计算）。缝合切口。整个过程均在手术显微镜下完成操作。10天后54只大鼠施行减压术。即取出压迫的螺丝和扩大螺孔。将该组动物作为减压组；将未施行减压术的动物作为压迫组。分别于初期手术后的第11，12，13，16，20，30，40，60，90天进行实验观察并取出脊髓标本进行组织学研究，各时间段大鼠数每组各为6只。
二、组织学研究
实验动物深度麻醉后开胸，用4％磷酸缓冲福尔马林液做灌流固定，取T11～T13水平的脊髓组织。在4℃冰箱中固定24小时后，置入磷酸缓冲蔗糖溶液中逐级过渡，每次均至脊髓组织沉入瓶底。－80℃冰箱中用Tissue－TekOCT复合物做冰冻包埋。脊髓组织连续横截冰冻切片，片厚30μm。取脊髓压迫部、压迫部近端及尾端1cm处切片各6张，分别做Nissl染色和免疫组化染色。其中免疫组化染色的第一抗体为单克隆抗胆碱乙酰化酶抗体(ChAT，1E6,1∶250,chemicon international inc)，第二抗体等采用DAKOLSAB药盒。显示剂采用Avidin－FITC以作荧光观察。采用共焦激光扫描显微镜对荧光染色切片进行观察，获取的图像信息被存入光盘以供详细分析。
三、图像分析
采用Macintoshi Power PC 7100，对光盘中储存的ChAT免疫荧光染色图像和Nissl染色图像进行分析，应用图像分析软件为NIH Image(Version1.54)。分别对Nissl染色中的脊髓前角神经细胞和免疫组化染色中脊髓前角相应部位的ChAT阳性细胞进行计数。按下列公式算出ChAT阳性细胞率。
阳性率=ChAT阳性细胞数/Nissl染色神经细胞数×100％
四、实验动物后肢神经功能的评分
采用Gale等[1]的动物综合神经功能评分法，对实验动物的下列指标进行观察评分。其中包括：足趾伸展、放置、提肢、伸肢、疼痛和受压回缩反应、受热反应、爬格、斜台位置维持等。以神经功能丧失率来表示。其中100％为完全功能丧失，而0则为神经功能完全正常。
结果
一、实验性大鼠脊髓压迫模型的一般观察
根据大体标本可见本研究所采用的脊髓压迫方法能造成较为均一且能够重复的大鼠脊髓压迫模型。但在组织学的显微结构上仍可观察到脊髓损伤和继后的组织学改变具有一定的个体差异。根据我们预实验的结果，在达脊髓前后径60％及以上的压迫可以造成脊髓组织的不可逆变的毁损。为此，我们在本研究中选用了50％的脊髓压迫模型作为研究对象。
二、组织学的变化
在正常大鼠脊髓前角中分布着大小不一的ChAT阳染的神经细胞。且分布较为均匀，各细胞的染色强度也较为一致（图1）。当脊髓受压后这些ChAT阳染细胞可出现了下列的变化：(1)阳染细胞的数量锐减；(2)ChAT染色强度减弱；(3)受压数天后若脊髓压迫状态仍持续存在，可有一轻微的ChAT阳染细胞率的反弹。这些变化主要出现在脊髓受压的部位，但受压的头侧端和尾侧端也可累及，只是程度较轻。与脊髓压迫组相比较，脊髓减压组则表现出以下的几个特点：(1)ChAT阳性细胞率在脊髓减压后的数天内有一较为明显的反弹；(2)在脊髓原受压的部位反弹后的阳性细胞率仍不能达到正常的水平；(3)受压头端和尾端的阳性细胞率最终可达到或接近正常的水平（图2a、b，表1，2)。
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