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慢性应激对糖尿病倾向鼠几种组织抗氧化酶影响的差异及其意义 |
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;0.05). Conclusion： The synergistic actions of chronic stress and STZ-induced diabetes-prone status can exacerbate the decrease of antioxidant enzyme activities and formation of LPO in the pancreas of mice specifically. This may impair insulin secretion and promote heperglycemia in STZ mice.
Key words：Chronic stress, Diabetes mellitus, Insulin, Antioxidant enzymes, Lipid peroxidation▲
近年来，大量研究表明，抗氧化酶活性下降和/或氧自由基增加与糖尿病发病及并发症发生有着密切关系［1］。我们的系列研究以小剂量链脲佐菌素(STZ)重复注射引起昆明小鼠胰岛较轻微的病理损伤，诱导动物的糖尿病倾向，用以研究实验性糖尿病的环境促发因素及作用机理［2］，已发表的报道显示慢性应激可促使STZ诱导的糖尿病倾向小鼠(简称STZ鼠)血糖持续升高，且可能有中枢及外周的多种神经内分泌因素共同参与其促发过程［3］。为获取慢性应激作用于实验动物引起的累积性的重要病理生理改变信息，我们选择STZ的特异靶标组织(胰腺)、糖尿病并发症有关的组织(心脏)和氧化代谢的主要器官(肝脏)进行观察，对比分析正常鼠与STZ鼠慢性应激后以上各组织抗氧化酶活性和氧自由基反应产物的变化，并讨论其意义。
1 对象与方法
1.1 对象
若干新生同龄昆明小鼠(生后7～10天，雌雄各半，体重4.5±0.3 g)，随机取80只鼠腹腔内注射STZ(美国Sigma公司产品，溶解在0.1 mmol/L柠檬酸缓冲液内，PH4.0)，40 mg/kg，1次/天，连续2天(简称STZ鼠)；另取40只鼠腹腔内注射等量柠檬酸缓冲液(简称正常鼠)。注射后30天查血糖，以13.9 mmol/L为标准，筛去高血糖症鼠，再随机选取40只STZ鼠和20只正常鼠(雌雄各半)进行实验。STZ鼠按血糖、性别匹配后随机分入对照组20只和应激组20只，正常鼠也依上匹配后分入对照组10只和应激组10只，4组实验鼠血糖基础值差异无显著性。动物室内光照时间上午8点至下午8点，室温保持24 ℃，通风良好，喂以全价营养饲料，自由进食饮水，除实验应激外无其他不良刺激。
1.2 方法
1.2.1 慢性应激源 参照Carter等［4］建立的慢性、多相性应激法，经改良后建立本实验的应激方法：(1)限制：将小鼠放入空底12 cm×5 cm×5 cm铁盒内，置于栅板上，保证小鼠不受压，但运动受限，且无光源，限制刺激每周随机择时进行3次，每次30分钟；(2)旋转：自制旋转器，转速为33转/分，在此转速下离心力最小，旋转刺激每45～150分钟内进行1次，每次15分钟；(3) 拥挤：标准小鼠笼，按应激组10只/笼，对照组5只/笼喂养。应激组从鼠龄45天起开始给予以上应激，持续6周。
1.2.2 标本采集 ①应激实验前、后剪鼠尾取血测空腹血糖(FBG)各1次；②应激实验6周后，断头处死全部实验鼠，将血液收集在预冷试管内(含1mg/L Na2EDTA20 μl,抑肽酶20 μl)，充分混匀后低温离心20分钟(4 ℃，3000转/分)，取上清液贮于-70 ℃冰箱待测血浆胰岛素(FINS)；③钝性分离胰腺、心脏、肝脏，用预冷(4 ℃)生理盐水冲洗，滤纸吸净表面残液，然后各剖取部分组织按1∶10(W∶V=1 g∶10 ml)加入预冷(4 ℃)匀浆液(0.15 mol/L磷酸盐缓冲液，PH7.4，含1 mg/ml大豆胰蛋白酶抑制剂)，冰浴匀浆后部分分装待测各组织脂质过氧化物(LPO)含量；各组织其余部分匀浆离心30分钟(4 ℃，14 000 g)，取上清，待测总蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。
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