二恶英及其类似物III食品测定方法

　　80年代中期以来广泛使用双柱法，提取液首先经活性炭吸附，用二氯甲烷洗脱，将平面化合物（包括PCDD/Fs）与非平面化合物分离。〔17〕用甲苯对活性炭柱反相洗脱平面化合物，再用氧化铝柱将PCDD/Fs与其它平面化合物分离(如：非邻位取代的PCBs、多氯代萘)。此法对复杂生物样品的分析十分适用，已有自动化仪器商业供应〔4，18〕。近年来也有采用HPLC分离PCDD/Fs的报道，主要用于2,3,7,8-TCDD的定量分析，也用于处理难以净化样品分析其它PCDD/Fs。〔13〕

　　提取、净化方法的优劣，应以验证其有效性来确定。通过测定加标样品及基质空白，可获得检测浓度下的回收率。PCDD/Fs分析时至少需要三套标准：一套为17种12C-PCDD/Fs；一套为15种13C-PCDD/Fs的定量内标和2个13C标记的用于确定色谱保留时间的内标；另一套为考察净化效率的37Cl-2,3,7,8-TCDD标准。

　　1.4　分离　净化手段尽管复杂，最终的提取液仍存在氯代化合物的干扰。这就需要良好分离技术。化学键合固定相的HRGC是有效分离PCDD/Fs的唯一选择。〔13，19〕常用WCOT毛细管柱，长度为15～60m，内径0.22～0.35mm，内膜厚度为0.15～0.25μm。非极性或弱极性固定相(烷基/芳基硅烷，如OV1、SE30、SE52、SE54、PS255、DB-1、DB-5、OV17-01等)可有效地将PCDD/Fs分离为氯原子取代数相同的化合物的组(如:所有TCDDs和TCDFs及所有PeCDDs和PeCDFs等分离），而极性固定相(氰基硅烷，如silar10c、SP2330、SP2340、CP SIL88等)可将一组中的异构体进行分离。迄今为止，尚未见仅用一根色谱柱即可分离所有同系物异构体的报道。使用欧共体规定使用的非极性色谱柱（如DB-5）分析仅有2,3,7,8-取代的PCDD/Fs，同时使用非极性色谱柱和极性色谱柱（如SP 2331和CPSIL 88）可分离其它位置上氯取代的PCDD/Fs。〔6〕食品中所要测定的是17种2,3,7,8取代的PCDD/Fs，仅采用非极性的色谱柱基本可以满足要求。〔5〕

　　色谱柱的柱长、内径及涂膜厚度决定了操作条件（温度和载气流速）及被分析物的保留时间。通过对要定量的17种2,3,7,8取代的PCDD/Fs同系物异构体（13C标记与未标记）标准品比较获得保留时间。为能准确鉴定被分析组分，校准标准的使用极为必要。应单独测试每个HRGC系统中同系物异构体的色谱出峰次序（文献仅作为参考），因此在仪器分析前需要测试柱效的PCDD/Fs标准进行证实，也可使用含已知同系物异构体成分的样品提取液（如飞灰）。

　　1.5　定量　要尽量减少化学噪声和改善检出限，以保证PCDD/Fs这一类复杂化合物的痕量分析。采用选择离子监测(SIM)的质谱法，以13C稳定同位素为内标，校正标准测定各个同系物异构体的响应因子和线性范围。〔5～13〕定量检测主要采用SIM技术监测氯同位素2个分子离子（M+，M++2）或其它丰度较高离子，同时监测相应的13C稳定性同位素内标氯同位素的两个分子离子，通过不同窗口对氯不同取代程度的异构体分别定量。这可减少共提取物和其它污染物的干扰，提高检测选择性和灵敏度。所使用仪器包括四极杆低分辨质谱仪（LRMS）、双聚焦磁式扇形高分辨质谱仪（HRMS）和质谱－质谱串联（MS-MS）。HRMS通过监测精确质量提供了最高的选择性，因此HRMS是PCDD/Fs测定的首选仪器。电子轰击源为PCDD/Fs分析的常用电离方式(EI)。阴离子化学电离(NCI)对高氯取代化合物有更高的灵敏度，但不适合低氯取代的化合物，如2,3,7,8-TCDD的分析。〔5，6〕

　　MS方法的灵敏度不是由标准溶液的信噪比提供，而是由样品基质条件下的信噪比决定。LRMS在理论上可以达到检测要求的灵敏度，但由于复杂基质和共存的PCBs及其它氯代化合物的干扰，食品中PCDD /Fs低于pg/g水平的分析的灵敏度和其它技术指标都难以达到分析要求。〔4，6，19，20〕为了得到分析食物中TCDDs的准确结果，分辨率在10000以上的HRMS成为唯一选择。因为TCDD的M+离子m/z为319.8963，而干扰物二氯二苯基二氯乙烯的M++4离子为319.9321，需要分辨率为9,000的HRMS

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