重组抗HBx单链噬菌体的表达

周　铬　刘康达　龚　奕　何　进　秦慧莲　何　曦

　　中国图书分类号　R371
　　摘　要　目的：进一步探索重组基因工程抗体在原核系统中有效的活性表达途径。方法：在已构建的抗HBx单链抗体(ScFv)的基础上，利用粘粒载体构建了抗HBx单链噬菌体抗体(phage antibody)，并转化大肠杆菌。结果：该噬菌体抗体经辅助噬菌体M13KO7诱导和噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)融合表达，并组装成噬菌体衣壳蛋白可溶性表达于培养液上清，经ELISA和Western-blot的结果证实可溶性表达产物具有HBx抗原的特异性亲和力。结论：单链噬菌体抗体的构建表达成功，可望成为原核系统中表达筛选特异性抗体可变区及有效制备活性基因工程抗体的简捷途径。
　　关键词　噬菌体展示技术　基因工程抗体　乙型肝炎X抗原

Expression of recombinant anti-HBx single chain phageantibody

ZHOU Ge,LIU Kang-Da,GONG Yi et al.
Zhongshan Hospital,Shanghai Medical University，Shanghai 200032
QIN Hui-Lian,HE Xi.
Department of Immunology，Shanghai Medical University，Shanghai 200032

　　Abstract　Objective:To study the expression of recombinant anti-HBx single chain phage antibody.Methods:The anti-HBx single chain phage antibody(pScFv) was constructed for the study on active expression of genetic antibody in E.coli.The anit-HBx ScFv gene was recombined with phagemid vector (pCANTAB) and transferred into host bacteria.Results:The anti-HBx pScFv was induced with helper phage M13KO7.The soluble expression products fused with phage minor coat protein was secreted which was detected specific binding affinity by Western-blot and ELISA assay.Conclusion:The successful construction and expression of anti-HBx pScFv might establish the method for the active selecting and preparing the specific antibodies in the E.coli expression system.
　　Key words　Phage display　Recombinant antibody　HBxAg

　　作为肝癌相关抗体，抗HBx单克隆抗体多年来一直被应用于肝癌实验性治疗和亚临床治疗的研究，并取得了一定的疗效［1］。为了进一步解决单克隆抗体在临床治疗中的Human Anti-mouse Antibody(HAMA)反应，前期我们构建了原核表达的嵌合抗体和单链抗体［2，3］。虽然采用了金属离子配体螯合纯化技术解决了重组抗体的大量纯化问题，重组抗体的复性问题限制了重组抗体进入实验性研究的进程。本研究试图通过构建噬菌体抗体融合表达载体来解决基因工程抗体可变区的活性原核表达，为基因工程抗体进入实验性导向研究提供基础。

1　材料与方法
1.1　材料　HBx单克隆抗体轻，重链可变区基因由本组克隆制备［3］，单链抗体构建载体pOPE-51及重组HBx抗原为德国癌症中心提供(DKFZ，Heiderberg,Germany)，噬菌体抗体构建载体PCANTAB，由中国科学院，上海生物化学研究所提供，限制性内切酶为Gibco公司产品，PCR扩增及DNA测序试剂为PE公司产品，酶标抗His-tag抗体，酶标抗噬菌体抗体为Pharmica公司产品。
1.2　PCR扩增单链抗体基

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