三种抗原检测抗幽门螺杆菌抗体的临床意义评价

　　幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染的诊断方法近年来有了很大进展，特别是血清学检测方法，因其为非侵入性检查方法，并且经济简便而倍受重视，所用抗原的特异性是关系到此方法诊断符合率高低的关键。为此，我们取实验室制备的三种抗原，用金标免疫渗滤法(Dot Immunogold Filtration Assay, DIGFA)进行HP抗体的对比检测。

1　材料与方法
1.1　HP菌液　由浙江医科大学微生物学教研室方平楚教授惠赠。
1.2　抗原制备
1.2.1　尿素酶抗原，略加改良提纯［1］，HP菌液用洗脱液(0.05 mol/L Tris-HCl，pH8.0)稀释至适当浓度，经超声粉碎后，高速离心取上清液，然后用Sephadex G-200(Pharmacia公司)过柱，收集其活性峰，经浓缩后，-20℃保存备用。
1.2.2　HP全菌破碎物抗原将HP悬液置-20℃，反复冻融3次，冷浸3 d，用超声波粉碎后，经高速离心，取上清液即可。
1.2.3　HP培养上清液抗原，取HP悬液上清液，经微孔膜(φ0.23 μm)过滤，滤液经高速离心，取上清液于-20℃保存。
1.3　血清样本
1.3.1　HP阳性血清、阴性血清各50份，由浙江医科大学附属第二医院提供。血清质控标准：HP培养、胃粘膜组织涂片检查、尿素酶试验3项指标中，有2项以上阳性者为阳性，三者皆阴性者为阴性。
1.3.2　内窥镜检查患有各类胃病病人血清258份，由德清市第二人民医院提供。
1.4　检测方法及操作流程　按沈丽英等报道的DIGFA进行［2］，用幽门螺杆菌ELISA试剂盒(深圳晶美生物工程公司，进口)做检测对照，操作按说明进行。

2　结果
2.1　敏感性、特异性比较　实验选择HP阳性、阴性血清各50份，用3种抗原进行HP抗体测定，结果显示，尿素酶、HP全菌破碎物及上清液抗原的敏感性依次为100%、96%和76%；特异性分别为98%、92%和64%(表1)。将三种抗原的检测结果分别做两两比较，经χ2检验，其敏感性和特异性在尿素酶和细菌破碎物抗原之间无显著性差异(P＞0.05)。但培养上清液抗原与前二种抗原比较，差异具有非常显著性意义(P＜0.01)。

表1　三种抗原检测抗HP抗体的敏感性、特异性(n=50)
Tab.1　Sensitivity and specificity in detection of anti-HP antibodies using 3 antigens(n=50)
 

Sera No. of positive cases
Urease Crude abstract Supernatant
Patient 50(100%) 48(96%) 38(76%)
Normal 1(2%) 4(8%) 18(36%)

2.2　不同抗原浓度比较　取HP阳性血清20份，血清浓度不变，将抗原稀释成0.25、0.20、0.15、0.10和0.05 mg/ml，分别取1 μl在硝酸纤维素膜上点样，然后按上述操作流程检测HP抗体，结果见表2。在不同浓度下，前二种抗原对HP特异性抗体检测结果无明显差异(P>0.05)。当抗原浓度为0.05 mg/ml时，检出率仍达85%和75%。而HP培养上清液抗原浓度下降，其特异性抗体的检出率明显下降，至0.05 mg/ml时，检出率为零。

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