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大鼠颌下腺GnRH及其受体的免疫组织化学双标记和年龄变化 |
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金花淑* 黄威权 张金山 文永植* 张崇理**
(第四军医大学组织学胚胎学教研室，西安 710032；*延边医学院组织学胚胎学教研室，延吉；
**中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室，北京)
摘 要 用免疫组织化学法，以邻片双标记技术研究了大鼠颌下腺内GnRH及GnRH受
体的分布；并对不同发育阶段大鼠颌下腺内GnRH及其受体进行了原位定量分析。结果
表明，雄性成年大鼠颌下腺浆液性腺泡的腺上皮细胞及各级导管上皮细胞既呈GnRH又
呈GnRH受体免疫反应性。60d龄内，大鼠颌下腺的GnRH及其受体的含量随年龄的增长
而增多，60d龄~90d龄，其含量相对恒定。以上结果提示，GnRH可能以自分泌的方式
参与了颌下腺的发育成熟过程及分泌功能的调节。
关键词 GnRH GnRH受体 双标记 年龄变化 免疫组织化学 颌下腺
促性腺激素释放激素(GnRH)主要分布于下丘脑[1]，它对垂体前叶促性腺激素的释放
起重要的调节作用。但随着研究的深入，人们发现下丘脑以外的许多器官也存在GnRH，
而且还证明不同器官的GnRH发挥着不同的功能[2]。我们先前的研究发现大鼠胃、肠、
胰能自身合成GnRH[3,4]。新近我们又证明大鼠颌下腺的腺泡上皮细胞和导管上皮细胞不
仅含有GnRH免疫反应性物质，而且含有GnRH-mRNA杂交信号[5]，说明颌下腺也能自身
合成GnRH。本实验用免疫组织化学法，研究了大鼠颌下腺GnRH及其受体的共存关系及
相对含量的年龄变化，为了解GnRH对颌下腺发育成熟过程的可能功能意义及调节方式
提供形态学依据。
材料和方法
1.试剂
兔抗GnRH抗体由中国科学院动物研究所生殖内分泌研究室制备和提供。GnRH抗独
特型抗体由本室自制。链霉亲合素-生物素复合物(SABC)试剂盒为武汉博士德生物工程
公司产品。
2.组织材料
雄性SD大鼠30只分为6组，每组5只；分别为1d龄、5d龄、12d龄、30d龄、60d龄和
90d龄。动物在戊巴比妥钠麻醉下剪开右心房放血处死，立即取出颌下腺投入Bouin液固
定12h左右，石蜡包埋后切成2μm厚的切片，贴于涂有铬钒明胶的载玻片上。为便于比
较，各年龄组的标本均贴于同一张载玻片上进行免疫组织化学染色。
3.免疫组织化学反应程序
切片经脱蜡水化后，按免疫组织化学ABC法程序进行染色。兔抗GnRH抗体及GnRH
抗独特型抗体稀释度分别为1∶4 000和1∶200；生物素标记的羊抗免lgG抗体稀释度为
1∶200；SABC复合物的稀释度为1∶100。第1抗体于4℃冰箱孵育过夜，生物素标记的
羊抗兔lgG抗体于室温孵育1h，SABC复合物室温孵育30min。阴性对照试验包括用正常
兔血清取代第1抗体和用PBS取代第1抗体，其余步骤同上。
4.邻片免疫组织化学双标记法
于90d龄组大鼠颌下腺切片中选相邻切片，分别以GnRH抗体和GnRH抗独特型抗体，
按上述免疫组织化学反应程序进行邻片双标记研究。
5.GnRH及其受体免疫反应性物质的原位定量
用Q-500图像分析仪(美国Leica公司)对各年龄组的GnRH及GnRH受体免疫反应性物
质的相对含量进行定量，每例测10个细胞，每组测50个细胞，用计算机打出每个细胞
GnRH及其受体相对含量的平均值及标准差，然后进行t检验统计学处理。
结 果
GnRH及GnRH受体免疫反应性细胞呈棕色，背底不着色，反差明显，易于识别，两
种阴性对照试验均呈阴性反应。
1.邻片的GnRH及GnRH受体的分布
GnRH及GnRH受体免疫反应性细胞在雄性成年大鼠(90d龄)颌下腺的分布较广泛，浆
液性腺泡的腺上皮细胞、闰管、颗粒曲管、分泌管、排泄管的管壁上皮细胞均呈GnRH
免疫反应性，阳性反应物质定位于胞质内，胞核呈阴性；导管上皮细胞的染色程度较腺
泡上皮细胞为强(图1)。邻片的同一结构GnRH受体也呈免疫反应性，细胞内阳性物质的
分布亦与[1] [2] 下一页
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