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大鼠下丘脑内神经激肽B受体阳性神经元向孤束核的直接投射 |
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管振龙 丁玉强 龚良维 陈良为 郑恒兴 李继硕
(第四军医大学解剖学教研室 梁钅 求琚脑研究中心，西安 710032)
摘要 为了研究神经激肽B(NKB)可能的升压途径，用免疫荧光组织化学方法结合荧光金(FG)逆行追踪技术研究了下丘脑内神经激肽B受体(NKR)阳性神经元向孤束核(NTS)的投射。FG微量注射于NTS后，FG逆标细胞主要分布于下丘脑背侧区、室旁核、穹窿周区、外侧区的背侧部和腹外侧部；而NKR阳性细胞主要出现于下丘脑的背侧区、室旁核、穹窿周区、外侧区的中段、视上核和乳头体内侧核的内侧亚核。免疫荧光染色结果显示：双标神经元分布在下丘脑背侧区、穹窿周区、外侧区的背侧部和腹外侧部，主要为圆形或椭圆形的中型细胞。双标细胞占FG标记细胞总数的11.2%、占NKR阳性细胞总数地11.9%。研究结果显示：下丘脑内部分NKR阳性神经元投射至NST，这些投射神经元可能具有调节血压的作用。
关键词 神经激肽B受体 下丘脑 孤束核 免疫荧光组织化学 大鼠
哺乳动物神经系统内束激肽(tachykinin)家族成员主要有P物质(substace P,SP)、神经激肽A(neurokinin A,NKA或substance K)和神经激肽B(neurokinin B,NKB或neuromedin K)。它们作为神经活性物质在神经系统中起着重要作用［1］。近年来，这3种物质的受体(SPR、SKR、NKR或NK1、NK2、NK3)已被克隆，均属于G蛋白偶联系体［2］。大量研究已证实SPR和NKR广泛分布于中枢神经系统和周围组织，而SKR则主要分布于周围组织内［3］。
生理学的研究表明NKB具有多种生理作用。归纳起来主要有以下三方面，一是调节血压、呼吸、咀嚼、盐的摄取和性行为等功能活动；二是在脊髓水平具有抗伤害感受(anti-nociception)的作用［4～6］；三是与运动调节有关［7］。与NKB的功能相一致，大量表达NKB受体(NKR)的神经元分布于隔区、下丘脑、臂旁核、孤束核、延髓和脊髓背角浅层及中缝核簇等［8］。
以往对NKR的升高血压机制的研究结果提示，NKB可通过激活下丘脑视上核和室旁核的NKR阳性神经元释放加压素从而引起血压升高，但这可能不是NKB升高血压的唯一途径。首先表达NKR的阳性神经元分布于除视上核和室旁核以外的具有调节血压功能的区域，如下丘脑背侧区、穹窿周区、外侧区［8］；其次这些脑区通过直接的纤维联系影响脑干内调节心血管活动的核团或区域，如孤束和延髓腹外侧区等［9～11］。因此，为研究NKB可能的升压途径，本实验采用免疫荧光组织化学方法结合荧光金(FG)逆行追踪技术调查了大鼠下丘脑内NKR阳性神经元向孤束核的投射。
材料和方法
实验共用成年雄性SD大鼠14只，分为两组，第一组(2只)用于观察NKR阳性细胞在下丘脑内的分布；第二组(12只)用于荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组织化学双标染色。
第一组动物在腹腔注射戊巴比妥钠(100 mg/kg)深度麻醉下，经升主动脉先用100ml生理盐水冲洗血液，继之用含4%多聚甲醛的0.1mol/L的磷酸缓冲液(PB，pH7.2)500ml灌注固定。立即取脑，在上述固定液中后固定3～4h(4℃)，移入30%蔗糖的0.1mol/L PB(pH 7.2)内至沉底(4℃)。将下丘脑作冰冻连续切片，片厚20μm。切片收集于0.01mol/L PB配制(pH 7.2)的生理盐水(PBS)内。然后进行免疫组织化学染色，具体步骤如下：在室温下依次入：(1)兔抗大鼠NKR的IgG(0.5mg/L，关于此抗体的制备、提纯和鉴定见文献［8］)孵育过夜；(2)结合物质素的羊抗免IgG(Vector:1∶200)，孵育2h；(3)ABC复合物(Vector;1∶50)，孵育1h。其中，一抗和二抗用含0.3% Triton X-100、0.2%驴血清和0.03% NaN3的0.01mol/L PBS(pH 7.2)稀释，ABC复合物用含0.01% Triton X-100的0.01 mol/L PBS(pH 7.2)稀释。以上每一步之间均用0.01mol/L PBS(pH 7.2)漂洗3次。每次5 min。最后，切片在含0.003% H2O2和0.05% DAB的Tris HCl缓冲液(pH 7.6)内呈色20～30 min。裱片后自然干燥、脱水、透明、DPX封片。明视野下观察并摄片。
第二组动物在戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉下，首先剪开环枕膜，在直视下于闩水平，用前[1] [2] 下一页
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