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大鼠RAPD标记的观察 |
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李昕权 李丰益
摘 要 采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术, 分析SD和Wistar二种大鼠的基因多态性, 探讨用RAPD标记鉴别二种大鼠及其血标本实验中的认证。 结果表明, 二种大鼠表现出了各自不同的多态性RAPD标记, 作为大鼠的分子标记, 可在基因水平区别二种大鼠。故认为是一种大鼠研究的分子依据。
关键词 大鼠, 随机扩增多态性, DNA
中图分类号 Q953, Q523
Random Amplified Polymorphic DNA Analysis in Rat
LI Xin-Quan
(Hospital of Military Academy of Medical Sciences, Beijing 100039)
LI Feng-Yi
(Second University Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041)
Abstract Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) was developed for analysing genetic polymorphism in SD and Wistar rats. The results show characteristic RAPD patterns between two strain rats. As molecular markers of rats, it could be used to distinguish species of rats between SD and Wistar rats in genetic level. The RAPD marker might be a potential tool for the study of rats.
Key words Rat, DNA, RAPD
DNA多态性的差异是一种生物区别于另一种生物的本质特征。从DNA的差异水平分析动物的分子特征, 鉴别物种, 为动物遗传学研究提供了新的分子证据。 随机扩增多态DNA(Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD)是由Williams和Welsh 等发展起来新的遗传标记分析技
术[1～3]。RAPD是建立在聚合酶链反应(PCR)基础之上, 利用多种9～10碱基的随机引物, 对所研究的基因组DNA进行分析, 再经电泳检测被扩增的DNA的多态性, 即RAPD标记。RAPD标记客观反映了每一生物基因组之间的差异, 其绝大多数符合孟德尔遗传规律。RAPD分析所用引物没有生物种属之间的界限, 且不必预先知道被分析的基因核苷酸序列, 适用于任何一种生物的研究。已被用于小鼠、大鼠、蛇、貉等动物的种属鉴定, 基因定位和遗传连锁图等研究[3～5]。本文初步应用该技术, 分析SD和Wistar二种大鼠基因组的多态性特征, 探讨以RAPD标记鉴别二种大鼠及实验中所使用大鼠血标本来源的认证。
1 材料和方法
1.1 大鼠
SD和Wistar大鼠各10只, 雌雄各5只, 由华西医科大学实验动物中心提供。
1.2 提取DNA
乙醚麻醉大鼠后, 断尾取血约1ml, 肝素抗凝, 加二倍体积蒸馏水低渗破碎红细胞, 离心分离白细胞, 以生理盐水洗涤二次。加入提取缓冲液1ml(150mmol/L NaCl, 10mmol/L EDTA, pH8.0, 10mmol/L Tris.HCl, pH8.0, 2%SDS)稀释混匀, 再加10% SDS 100ul混匀, 再加蛋白酶K至终浓度200ug/ml, 37℃过夜。继以等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)萃取, 10 000rpm离心10分钟分层。取上层水相用等体积氯仿∶异戊醇(24∶1)萃取, 10 000rpm离心10分钟, 吸出水相置另一管内, 加入1/10体积3mol/L 醋酸钠, 二倍体积冷无水乙醇混匀, 见有絮状DNA析出, 以无菌玻璃棒绕出, 70%乙醇洗涤, 真空抽干[6]。适量TE(10mmol/L Tris.HCl, ph7.6 1mmol/L EDTA)溶解, 测定260nm吸光度, 计算DNA含量, 备用。
1.3 引物
10种10碱基随机引物, Operon公司产品,[1] [2] 下一页
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