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血栓素A2 肿瘤坏死因子和地塞米松对兔气道平滑肌细胞增殖的影响 |
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胞排列成漩涡状，抗平滑肌α-肌动蛋白抗体免疫组织化学染色，也证实为平滑肌细胞［3］。
(五)TXA2、TNF-α、Dex对ASMC增生的影响：以4×103个/孔将细胞接种于96孔培养板内， 经含10%FCS的DMEM培养72 h后，细胞达到融合状态，吸去上清液，无血清DEME清洗两遍，加入1%FCS的DMEM，培养12 h后按下列步骤实验。
1.TXA2组：加入环-TXA2（为TXA2的稳定替代物，以下简称TXA2），使其终浓度为100 nmol/L。2.TNF-α组：加入TNF-α(终浓度300 pmol/L)。 3. TNF-α+TXA2组：用300 pmol/L的TNF-α预培养ASMC 4 h后，加入TXA2，使其终浓度为100 nmol/L。4.TNF-α+TXA2+Dex组：Dex(终浓度2 μmol/L)孵育ASMC 2 h后，用TNF-α(终浓度300 pmol/L)再预培养3 h，再加入TXA2(终浓度100 nmol/L)。5.空白对照组：不加上述任何因子，同时观察1% FCS对［3H］-TdR掺入量的影响。6.平行对照组：将TXA2(终浓度100 nmol/L)加入对数生长期的NIH/3T3细胞。
经上述处理后，每孔加［3H］-TdR 1.85×104 Bq/50 μL继续孵育18 h，终止时弃去上清液，胰酶消化、收集细胞，洗涤干燥后，测每分钟放射性核素闪烁计数值(counts.min-1)。
(六)细胞计数：将ASMC以8×104个/瓶接种于25 mL培养瓶内，按上述方式预培养后，改用1%FCS的DMEM，给予TXA2(终末浓度为100 nmol/L),TNF-α(300 pmol/L)+TXA2（100 nmol/L）及TXA2(100 nmol/L)+TNF-α(300 pmol/L)+Dex(100 nmol/L)，并分别于第1、3、6 d胰酶消化计数。
(七)统计处理：各项结果以均数±标准差()表示，结果统计采用t检验。
结果
运用［3H］-TdR掺入法，6 h孵育后，经检测TXA2组中ASMC放射值明显高于对照组，TNF-α预处理后再加入TXA2，ASMC中放射值与对照组无显著差异，显著低于TXA2组，当用Dex预先孵育ASMC后再用TNF-α及TXA2处理ASMC，则其［3H］-TdR掺入量又明显高于TNF-α+TXA2组及对照组，而3T3细胞应用TXA2后则无改变(表1)。
表1 TXA2、TNF-α、Dex对ASMC［3H］-TdR掺入的影响
Tab 1 Effects of TXA2，TNF-α and Dex on ［3H］-TdR
incorporation into ASMC (,n=8)
ASMC(counts.min-1) 3T3(counts.min-1)
Control 370±34 511±40
TNF-α 394±40 506±43
TXA2 1481±97*＃ 512±47
TXA2+TNF-α 431±27 508±51
TXA2+TNF-α+Dex 1 387±60*# 516±57
*P＜0.01, vs control group; #P＜0.01, vs TXA2+TNF-α group
经数天培养后，细胞计数亦显示TXA2组细胞数显著高于对照组，TXA2+TNF-α组则与对照组无显著差异(表2)。1%FCS对［3H］-TdR掺入ASMC无影响(表1)。
表2 TXA2、TNF-α对ASMC增殖的影响
Tab 2 Effects of TXA2 and TNF-α on proliferation
of ASMC (,n=9)
Cell counts(×104/mL)
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