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马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因转化烟草研究 |
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王永胜 扈廷茂 刘明秋 李丽莉 孔威
摘 要：将马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因由重组质粒pAPI189中亚克隆到双元表达载体pGA643的XbaI和KpnI位点之间，构建成高效表达重组质粒pGAPI3。三亲融合法将其转移至农杆菌LB4404。通过叶盘法利用此融合后的含有目的基因的农杆菌转化烟草叶圆片，在含有Km的培养基上筛选抗性芽。将抗性芽接种到生根培养基至长成完整植株后再移栽到土质中以获得转基因植株。通过目的基因的特异引物进行PCR检测以及目的基因的片段为探针进行Southern杂交检测，证实已获得马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的转基因烟草植株。
关键词：天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因；转基因烟草
分类号：Q785 文献标识码：A
文章编号：0253－9772(2000)03－0129－04
Transgenic Tobacco Established with Aspartic
Proteinese Inhibitor Gene
WANG Yong-sheng,HU Ting-mao,LIU Ming-qiu,LI Li-li，KONG Wei
(Department of Biology,Inner Mongolia University,Huhhot 010021，China)
Abstract：An aspartic proteinese inhibitor gene contained in the recombinant plasmid pAPI189 was inserted into the XbaI and KpnI site of binary vector pGA643 for constructing subclone pGAPI.The pGAPI was introduced into Agrobacterium LB4404 by coculturing the mixture of DH5α(pGAPI)、HB101(pRK2013) and Agrobacterium LB4404.We transformed tobacco leaves by coculturing them with Agrobacterium LB4404 which contained aspartic proteinese inhibitor gene and then screening the shoots with Tmedium containing kamnamycin (Km,100μg/ml).The shoots resistant to Km were transferred into the rooting medium.When roots were formed the whole plants were transferred into pots.PCR reaction using the primers complementing with potato aspartic proteinese inhibitor gene and Southern hybridization using the the fragments contained aspartic proteinese inhibitor gene as the probe were performed.The results of PCR and Southern hybridization showed that we obtained the transgenic tobacco plants.
Key words：aspartic proteinese inhibitor gene;transgentic tobacco plant
近年来抗病虫害的基因工程研究越来越受到人们的重视，其中利用基因工程方法将蛋白酶抑制剂基因导入植物体内进行昆虫病害的防治也得到广泛的研究。50年代中期Lipke等人〔1〕及Green等人〔2〕的研究结果均说明蛋白酶抑制剂可能在植物的天然抵抗昆虫系统中起着重要作用。此后有关的研究大都集中于丝氨酸类蛋白酶抑制剂，在80年代末Hilder〔3〕和Johnson〔4〕等分别将大豆胰蛋白酶抑制剂基因和马铃薯蛋白酶抑制剂基因转到烟草中获得了具明显抗虫能力，且可稳定遗传的转基因植株。1996年Duan〔5〕和Irie〔6〕等又分别将马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ[1] [2] 下一页
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