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氧反常心肌细胞内游离钙浓度的变化及丹参素和SOD的影响 |
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showing a significant Ca2+-overload.The changes of rod-shaped rates were similar to intracellular free calcium concentration.Salvia Miltiorrhizae and SOD can inhibit Ca2+-overload obviously (254.29±8.83 and 300.04±13.04 nmol/L vs H40minR20min 596.71±20.29 nmol/L,P＜0.01).Moreover,effect of Salvia Miltiorrhizae was more striking than SOD (P＜0.01).CONCLUSION:There is a significant Ca2+-overload in oxygen-paradoxed myocardial cells.Salvia miltiorrhizae and SOD have a definite protective effect on Ca2+-overload.
MeSH Myocardium; Oxygen; Calcium; Salvia Miltiorrhizae; Superoxide dismutase
自70年代初Jenning发现“心肌缺血再灌注损伤”与心肌细胞钙浓度大量增加可能有关以来，大量的研究都支持这一观点。目前认为“钙超载”是再灌注损伤的一个主要因素，细胞内钙超载是心肌缺血再灌注损伤的重要病理改变之一，被认为是细胞死亡的最后共同通路［1］。从这个理论出发，研究再灌注损伤时细胞内游离钙的改变并探讨如何防止钙超载，对于进一步阐明再灌注损伤的机理和保护再灌注损伤的心肌都具有重要的实际意义。本文用体外分离的大鼠心肌细胞复制氧反常模型以模拟再灌注损伤，用钙荧光探针（Fluo-3）测定细胞内游离钙浓度的改变，并观察丹参素和SOD对氧反常的心肌细胞内游离钙浓度的影响。
材料与方法
(一) 材料：1．灌流液成份与浓度：A液（mmol/L）：NaCl 143.0,KCl 8.0,MgCl2 5.0,CaCl2 1.8,Glucose 5.0,NaH2PO4 0.42,HEPES 5.0,pH 7.4；B液：不含CaCl2，其他同A液；C液：B液加0.1%胶原酶和50.0 mmol/L CaCl2；D液（mmol/L）：NaCl 118.0,KCl 30.0,MgCl2 0.5,KH2PO4 10.0,Glucose 10.0,谷氨酸 70.0，EGTA 0.5,BSA 2%,HEPES 10.0,pH 7.4；E液：D液中加10.0 mmol/L CaCl2。2．试剂：I型胶原酶（Sigma公司）；A23187（NAKARAI chemical Ltd）；Fluo-3/AM（Dojin，KYOTO JAPAN）；HEPES（分析纯，华美公司）；丹参素（上海第一医科大学药理教研室制备）；SOD（哈医大生化教研室研制，系纯化的小牛红细胞Cu-Zn-SOD；其它试剂均为国产分析纯。3．仪器：荧光分光光度计（RF-540型，日本岛津公司）；显微镜（Olympus公司）。
(二) 大鼠心肌细胞的分离与实验分组：健康雄性Wistar大鼠，体重200～250 g。按Farmer的方法［2］加以改进，体外分离心肌细胞，具体操作如下：按45 mg/kg腹腔注射0.6%戊巴比妥钠麻醉动物，同时注射0.2%肝素20 mg/kg抗凝，开胸，距主动脉根部3～4 mm剪断主动脉取出心脏，迅速移至非循环无作功的Langendorff灌流装置。用95%O2 5%CO2混合气体饱和的A液灌注15 min（灌流压为90 cmH2O）后，旋即用B液灌注5 min，使心脏停搏；用C液通过电子蠕动泵恒流循环灌注1 h，最后用D液非循环灌注5 min；剪下心室肌于适量的D液中，用眼科剪充分剪碎并反复吹打以分散心肌细胞，尼龙网滤过后，上清用D液洗3次，离心收集心肌细胞，悬浮于E液，调节细胞浓度为6×105/2 mL。实验分组如下：（1）正常对照组（持续通以95%O2 5%CO2，37°C温育40 min，n=11）；（2）缺氧40 min组（H40 min，持续通以95%N2 5%CO2，37°C温育40 min，n=11）；（3）氧反常组（H40 min R20 min， 缺氧40 min上一页 [1] [2] [3] 下一页
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