液氮浅低温冷冻对皮肤色素及黑色素细胞影响的实验研究

杨 磊 聂意飞 廖端宇 张建明 李鸿业 2005-12-13 13:03:50 中华现代皮肤科学杂志 2004年9月第1卷第1期

　　【摘要】 目的 研究液氮浅低温冷冻对皮肤色素及黑色素的影响。方法 用液氮浅低温冷冻机直接接触法和棉签法冷冻。结果 显示冷冻后家兔毛被黑而粗，与对照组不同，后者为细、软、色淡的毳毛样毛被，并且所有实验区伴有色素沉着，组织学显示表皮黑色素颗粒和黑色素细胞数目显著增多（P<0.001）。结论 浅低温冷冻可增加黑色素细胞数目和促进黑色素的合成，此为临床上用该法治疗斑秃和白癜风提供了理论依据。

　　关键词 液氮浅低温冷冻 黑色素 黑色素细胞

　　我们用液氮浅低温冷冻疗法治疗斑秃取得了满意的疗效 ［1］  。其有效率及痊愈率高、见效快、无副作用、方法简便等优点，优于斑秃的一般疗法，而且用该法治疗后的新生毛发为粗而黑的正常毛发，而非其它疗法后长出的细、软、色淡或白色的毳毛样发。我们进一步通过实验研究，证实了比与浅低温冷冻刺激了黑色素细胞，使之数目增加和功能有增强有关。

　　1 材料与方法

    1.1 动物 体重1.5～2kg的健康成年黑色家兔24只，雌雄不限。

    1.2 方法 实验组以接触法和棉签法随机分为两组进行了冷冻，每组各10只，每只兔臀部剪毛后不冷冻作自身对照，另设对照组4只，背部剪毛后不予冷冻。

　　1.2.1 接触法冷冻组 剪去兔背部毛被，以2%龙胆紫标记出直径2cm大小的实验区3处，用江苏泰兴电工器械厂生产的液氮冷冻治疗机接以直径1cm大小的冷冻头，以直接接触法冷冻已标记好的实验区，从冷冻头接触兔皮开始计时，冷冻15s，冻融2次为1个周期。1.2.2 棉签法冷冻组 同样剪毛后以棉签蘸液氮涂擦实验区，使局部结一层簿霜（约1s），自然融化后再涂擦2次为一周期。对照组及自身对照区均剪毛后不予冷冻。

    1.3 观察项目 （1）于实验组冷冻后每日肉眼观察各组局部皮肤及毛被色泽变化。（2）组织学检查:于冷冻后2h、24h、48h、7d、14d分别切除实验组与对照组皮肤，以10%甲醛固定、石蜡包埋切片，HE染色作光镜检查。随机观察每组几个视野的表皮黑色素颗粒的密度并计数黑色素细胞数目，做统计学处理。

　　2 结果

    2.1 局部皮肤及毛被色素变化

    2.1.1 接触法组 冷冻14d后，有2只兔在冷冻边缘区长出数根粗而黑的毛，长约0.2cm，28d后，各冷冻区边缘均布满一圈又粗又黑的毛，长约0.4cm。50d左右冷冻区中央开始长出灰白色毛。80d左右冷冻区毛长至1cm以上，局部皮肤均出现深黑色色素沉着，冷冻区中央灰白色毛边变为黑色，114d后皮肤色素沉着消退，毛被长至正常长度。

    2.1.2 棉签法组 冷冻后18d，一只兔在冷冻区散在地长出0.3cm之粗黑毛，23d左右，所有冷冻区均弥漫性地长出粗黑毛被，长约0.4cm，28d左右，局部皮肤出现色素沉着，49d以后，皮肤色素沉着渐消退，90d左右实验区毛被长度超过正常毛被长度。对照组及自身对照区:在实验组冷冻107d和114d左右始见有少量细软灰黑色兔毛长出，长度0.2～0.3cm，速度缓慢，共有3处对照区皮肤出现小片状色素沉着。

    2.2 组织学改变 冷冻2h后，皮肤水肿，真皮浅层毛细血管扩张、充血，并有嗜酸性细胞、淋巴细胞及少量浆细胞浸润，24h达高峰，48h后上述反应减轻。1周后组织水肿及细胞浸润消退，表皮及毛囊上皮呈增生状态，基底层色素颗粒及黑色素细胞数目增多，真皮毛细血管数目增多。皮肤色素沉着区活检:基底层及部分棘层下部色素颗粒呈弥漫性分布，黑色素细胞数目显著增多，遍及整个色素沉着区，与对照组形成鲜明对比P<0.001）。黑色素细胞形态与对照组差异无显著性。

    3 讨论

　　黑色素细胞对冷冻较为敏感，冷冻-30℃以下，黑色素细胞即被破坏，故在人类，深低温冷冻后形成的色素减退斑

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