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转化生长因子 亚型及其受体在人类系膜增生性肾小球肾炎各期病变表达的研究 |
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al accumulation of extracellular matrix in MsPGN.
【Key words】 Transforming growth factor beta Glomerulonephritis, membranoproliferative Extracellular matrix
系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis, MsPGN)是我国最常见的肾小球疾病，约占原发性肾小球疾病的50%。其病理改变为系膜细胞增生及系膜基质聚积和扩张。而系膜基质的过度聚积最终导致肾小球硬化和肾功能衰竭。研究发现，转化生长因子β(transforming growth factor β，TGFβ)在调控细胞外基质的聚积中起重要作用［1］。在哺乳类动物，TGFβ有三种亚型：TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3。在胚胎发育、组织修复和纤维化病变中，TGFβ三种亚型的表达不尽相同，提示在体内病理过程中，TGFβ各亚型所起的作用可能不同。TGFβ特异结合的受体有三种：Ⅰ型受体(TβRⅠ)介导细胞外基质的聚积，Ⅱ型受体(TβRⅡ)与TGFβ的抑制细胞生长的作用密切相关，Ⅲ型受体(TβRⅢ)则是将结合的TGFβ分子呈递于上述的两种受体而发挥作用。有关TGFβ1在肾小球疾病中的作用，已有大量文献报道。但有关TGFβ2、TGFβ3及与细胞外基质聚积有关的TβRⅠ在肾小球疾病中的作用，目前国外仅有少数报道［2，3］，而对于人MsPGN各期病变TGFβ各亚型及其受体的变化，尚未见报道。
材料和方法
1.标本：MsPGN患者的肾活检标本38例，其中轻度MsPGN 20例，中度MsPGN 10例，重度MsPGN 8例。以10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚度为4 μm。
2.试剂：第一抗体包括：兔抗人TGFβ1，β2，β3及TβRⅠ多克隆抗体(Couser教授惠赠，美国Santa Cruze公司产品)，鼠抗人Ⅳ型胶原、层粘连蛋白单克隆抗体、兔抗人纤粘连蛋白抗体(DAKO产品)，山羊抗人Ⅲ型胶原抗体(美国南方生物技术公司产品)。采用SP试剂盒(美国Zymed公司产品，购于北京中山生物试剂公司)，包括：生物素标记抗兔IgG抗体，生物素标记抗鼠IgG抗体，生物素标记抗山羊IgG抗体；辣根过氧化物酶(HRP)标记链酶亲合素(streptavidin)。
3.方法：采用免疫酶染色技术(LAB法)。步骤：脱蜡、水化。0.3%过氧化氢甲醇液灭活内源性过氧化物酶。0.1%透明质酸酶溶液(TGFβ各亚型及其受体染色)，或0.4%胃蛋白酶溶液(细胞外基质成分染色)，37℃消化30分钟。2%小牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异染色。滴加适当稀释的第一抗体，4℃过夜。滴加生物素标记的第二抗体(1∶300稀释)，37℃孵育30分钟。滴加辣根过氧化物酶标记的链酶亲合素(HRP-Streptavidin)，1∶300稀释，37℃孵育45分钟。滴加DAB-H2O2显色液，于显微镜下监测显色。最后苏木素对比染色，常规脱水、透明、封片。上述各步骤间(BSA封闭非特异染色一步除外)，均以Tris-HCl缓冲液冲洗。实验设空白对照及第一抗体动物正常血清对照，结果均为阴性。
4.结果处理：依据肾小球内染色面积，进行半定量分级［2］：0为无染色；1为肾小球内微弱的和点状的染色；2为轻度和节段性肾小球内染色；3为中度节段性或弥漫性(占肾小球面积50%以上)肾小球内染色；4为重度弥漫性肾小球内染色。
5.统计学处理：采用SPSS医学统计学软件，进行秩和检验。
结 果
1.TGFβ1、β2、β3及TβRⅠ的免疫组化染色(图1)：在轻度MsPGN时，肾小球内无TGFβ1、β2、β3及TβRⅠ的表达。在皮质部的肾间质中，可见少量的TGFβ1表达。TGFβ2及TGFβ3主要分布在远端肾小管和集合管。TβRⅠ在肾小管中有少量表达。中度MsPGN时，肾小球中可见TGFβ2、β3及TβRⅠ少量表达，TGFβ1仅呈微上一页 [1] [2] [3] 下一页
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