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血清sTNF |
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李萍 赵丽娟 曹建平
在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)的发病过程中，多种细胞因子参 与其免疫病理损伤过程，但对反映免疫调节功能具有重要意义的可溶性肿瘤坏死因子受体(s TNF-R)与SLE关系的研究，国外报道甚少，国内尚未见到有关报道。肿瘤坏死因子(TNF)是 在SLE的炎症与自身免疫反应中起重要调控作用的细胞因子，在体内外可激活T、B淋巴细胞 ，诱发炎症反应，与SLE的发生和转归密切相关，而TNF的所有生物学效应是通过靶细胞上的 肿瘤坏死因子受体(TNF-R)而发挥作用的［1］。因此为了研究SLE患者在发病过程中 血清sTNF-R、TNF-α与TNF-α/sTNF-R比值是否有改变以及这种变化对SLE发病机制、病 情活动的影响，本文以双抗体夹心ELISA法测定了50例SLE患者和30名健康人血清sTNF-RⅠ 、sTNF-RⅡ及TNF-α、TNF-α/sTNF-R的水平，现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
50例住我院SLE患者，符合1982年美国风湿病学会的SLE分类标准，男性5例，女性45例，平 均年龄(31±12)岁(14～60岁)，平均病程(2.6±1.4)年(4个月～6年)。其中30例为活动期 SLE患者，对疾病活动度的评价采用改良1992年欧洲SLE活动性评分标准，凡积分≥3分者认 为病情活动，20例为稳定期SLE患者。健康对照组30名，男2名，女28名，平均年龄(30±8) 岁(18～48)岁，来自我市健康献血员。病人组与对照组年龄、性别构成比在统计学上差异无 显著性。
1.2 实验方法
1.2.1 主要试剂及仪器：双抗体夹心ELISA人sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ试剂盒(购自深圳晶 美生物工程有限公司)。双抗体夹心ELISA人TNF-α检测试剂盒(军事医学科学院产品)。美 国伯乐3550酶标仪。
1.2.2 标本的采集及处理：晨起空腹取肘正中静脉血3 ml，置于EDTA抗凝管中，在4 h内 离心，3 000 r/min，10 min，收集上清然后加蛋白酶抑制剂苯甲基氟磺酸(PMSF)10 μl， 封闭于Eppdoff管内－20 ℃保存待检。
1.2.3 sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ的检测(ELISA法)：将已包被了抗sTNF-RⅠ单抗或抗sTNF -RⅡ单抗的酶标板在室温中平衡20 min。sTNF-RⅠ标准品的稀释：sTNF-RⅠ冻干标准品 含sTNF-RⅠ 4 000 pg 以标准品/标本稀释液1.0 ml复溶后浓度为4 000 pg/ml，倍比稀释 成4 000、2 000、1 000、500、250、125、0 pg/ml。sTNF-RⅡ标准品的稀释：sTNF- RⅡ冻干标准品含sTNF-RⅡ 4 000 pg，用标准品/标本稀释液1.0 ml进行复溶，静置15 mi n，混匀，复溶后浓度为4 000 pg/ml，再用标准品/标本稀释液倍比稀释成2 000、1 000、5 00、250、125、0 pg/ml。加入标准品稀释液100 μl至空白孔和零孔，加入标本和已稀释为 不同浓度的标准品各100 μl至相应孔中，标本和各浓度标准品均设复孔。37 ℃、90 min然 后用洗涤液洗板3次。除空白孔外，每孔加1∶100稀释的生物素化二抗100 μl，37 ℃ 、60 min，洗板3次。除空白孔外，每孔加1∶100稀释的酶联物100 μl，37 ℃ 20 min ，洗板3次，每孔加底物A、B各50 μl，避光37 ℃ 15 min。每孔加终止液1滴，即刻在450 nm处读数。绘制标准曲线：以sTNF-RⅠ、sTNF-RⅡ的标准品浓度作横坐标，A值作纵 坐标，以平滑线连接各标准品的标点，通过标本的A值可在标准曲线上查出浓度。TNF- α的检测：按试剂盒说明书进行。
1.2.4 治疗措施：30例患者完成激素加免疫抑制剂治疗。强的松剂量每日1～1.5 mg/kg 。免疫抑制剂为环磷酰胺(CTX)冲击治疗(CTX 0.4～0.6 g，2周一次)。每例平均完成2次 以上的CTX冲击，持续治疗时间6周以上。
1.3 统计学处理
实验数据用t检验及相关性分析。
2 结果
2.1 活动期、稳定期SLE患者与健康对照者血清sTNF-RⅠ、s[1] [2] [3] 下一页
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