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慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T辅助细胞1 2型因子的表达 |
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lls in advanced period of chronic hepatitis B was higher than t hat in stable period of chronic hepatitis B. The percentage of Th2 cells in CD4+T cells from HBV-infected individuals did not differ significantly in dif ferent stages, but higher than that of controls. Conclusions The results indicated that Th1 phenotype cytokines were associated with hepatic inflammatory activity of chronic hepatitis B and Th2 cel ls may be associated with the chronicity of HBV infection.
【Key words】Hepatitis B virus; Interleukin-4; Interferon-γ
小鼠T细胞克隆性分析将T辅助细胞(Th)分为Th1、Th2。Th1细胞以分泌白细胞介素-2(Inter l eukin-2, IL-2)、干扰素-γ(Interferon-gamma, IFN-γ)和肿瘤坏死因子-β(Tumor necrosis factor-beta, TNF-β)为特征，主要参与细胞介导的免疫反应并在抵御病毒等 细胞内致病因子方面起着重要作用，而Th2细胞以分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10为特征 ，主要调节体液免疫反应并在抵御细胞外致病因子方面发挥作用，并与细胞内病原所致的进 展性疾病相关联［1～3］。
在乙型肝炎病毒(HBV)感染中，病毒对感染的肝细胞并没有直接的致细胞病变作用，与HBV感 染相关的急慢性肝炎被认为是免疫介导性疾病，而且对自肝脏分离的T细胞克隆的研究认为T 细胞介导的细胞毒性可引起肝细胞的损伤。体外实验也已证实，通过识别肝细胞上HBV编码 的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)，细胞毒性T淋巴细胞(CTL)以HLA-1类限制的 方式损伤肝细胞。但其确切机制尚未阐明［4］。Th1/Th2细胞在宿主抵御病毒感染 中的作用近来备受关注［5］，为阐明Th1/Th2细胞在慢性HBV感染中的作用，我们采 用流式细胞检测仪(FACS)对慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)中单个Th1/Th2细胞内IL -4和IFN-γ的产生进行分析。
材料与方法
一、病例
本研究所有病例为第一军医大学南方医院感染内科1998年6～12月门诊及住院患者。按照199 5年(北京)传染病与寄生虫病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案(试行)》的临床肝炎诊 断标准，选择34例慢性HBV感染者，分为三组，慢性HBV携带者(AsC)12例、慢性乙型肝炎(CH B)中度13例及重度9例；正常对照12例取自门诊健康体检者。46例受检者中女16例，男30例 ，年龄17～54岁(平均32.6岁)。慢性HBV感染者的HBV血清学检查：HBsAg均为阳性，抗 -HBs 阴性(酶免疫法)，25例HBeAg阳性，9例抗-HBe阳性；正常对照组除3例抗-HBs阳性外，其 余9例H BV血清标志全部阴性，所有受检者抗-HCV均阴性(第二代酶免疫法试剂盒)。除AsC外的所有 慢性HBV感染者均经肝组织活检证实。
二、细胞
取新鲜肝素抗凝全血3 ml，常规密度梯度离心分离PBMC，以鼠抗人CD8+单克隆抗体(Beckm an Coulter Reagent, USA)及新鲜兔血清处理，去除CD8+ T细胞，制备无CD8+ T细胞的 PBMC。
三、FACS分析细胞内产生的细胞因子
参照Jung等［6］方法进行改进。新鲜分离的无CD8+T细胞的PBMC，在塑料培养皿 上贴附培养1.5 h后，移去贴附的单核细胞。以T细胞刺激剂佛波二酯PMA(Sigma)1 ng/ml、 钙离子导入剂Ionomycin 1 μmol(Sigma)、细胞内转移阻断剂Monensin 1 μmol(Sigma) 刺激细 胞37℃4 h；离心，去上清；以含0.5%(w/V)牛血清白蛋白的磷酸缓冲液(PBS)洗涤1次，离心 ，去上清；以含4上一页 [1] [2] [3] 下一页
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