微卫星DNA DXS1113的多态性与心境障碍

　　一、样本

　　1. MD组: MD患者80例，来自深圳市康宁医院、湖北医科大学附属第一医院精神科及上海市精神卫生中心1997年2月至1998年7月的住院患者，均经2名主治医师（或副主任医师）按美国精神疾病诊断统计手册第3版修订本MD诊断标准确诊。80例中男36例，女44例，平均年龄（30±11）岁。

　　2.对照组：80名健康人，均为深圳康宁医院及深圳市精神卫生研究所职工，均无血缘关系、本人及家庭无精神病史。80名中男43名，女37名，平均年龄（33±9）岁。

　　二、方法

　　1. DNA 抽提:确诊的MD组及对照组成员每人抽取静脉血5 ml，肝素抗凝，按常规方法提取白细胞基因组DNA，将抽提的DNA分组并分别编号，置于1.5 ml无菌小离心管中的无水乙醇中，保存于冰箱内（20℃）备用。

　　2.引物：聚合酶链反应（PCR）引物由中国科学院上海植物生理所植物分子国家重点试验室合成，序列为： (1) TC-AC-5′ACCTGTGGAGGATAG-TAGTCGACT-3′；(2) AG-TG-5′GGGAGCTTTAGAGAT-TTTGGTAAA-3′。

　　3. 放射性核素α-32P-dCTP：购于北京福瑞公司（批号980801）。

　　4. PCR反应体系：反应体系为10 ml，内含10 mmol/L Tris HCl（pH 8.3），1.5 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/L dATP、dTTP、dGTP，2 μmol/L dCTP，0.1 μl α-32　P-dCTP（11 100 MBq/mmol），每种引物各3 pmol，50 ng DNA和1 U Tag酶。

　　5. PCR反应：PCR循环在Perkin-Elmer 9600型DNA扩增仪上进行，每份试验标本先将反应体系置95℃变性2 min，72℃延伸7 min，置4℃保存。热循环参数是93℃30 s，59℃30 s，63℃45 s，共28个循环。循环完毕后，置63℃7 min，然后置4℃存放。

　　6. 电泳及放射自显影：配制7 mol/L尿素的6%变性聚丙稀酰胺胶，将10 μl PCR产物与20 μl上样液（95%甲酰胺, 0.025%二甲苯青，0.025%溴酚蓝和10 mmol/LEDTA）混合取3 μl点样，在42 cm×33 cm×0.04 mm的96孔点样胶上作垂直电泳，并以M13 mp18的DNA序列lMDder作为DNA分子大小的标准，电泳后立即揭胶，烘烤至干。

　　7.放射自显影：将烤干的胶装入合适的X线片暗盒，暗室内压片，放射自显影。

　　结果

　　一、 DXS1113 等位基因类型

　　对DXS1113多态性分析结果表明，在MD组和对照组中只检出12种等位基因，其分子量大小及基因频率分别见图1，2及表1。

图1　心境障碍患者DXS1113基因座的多态性分布

图2　正常人DXS1113基因座的多态性分布

　　从表1可见，158 bp和168 bp基因频率在MD组中较高，而在对照组中较低；170 bp和174 bp基因频率在MD组中很低，而在对照组中较高。吻合度测验表明，本组资料符合H-W平衡定律（P＞0.05）。在被检出的12种等位基因中的8种在MD组与对照组间的差异无显著性（P＞0.05），其中4种（158 bp，168 bp，170 bp，174 bp）等位基因频率差异有显著性（P＜0.05）。

表1　MD组与对照组DXS1113等位基因种类及频率的比较

　　基因

　　大小

　　(bp)

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