【摘要】 目的 观察新生大鼠海马齿状回的神经干细胞(NSCs)移植到阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内的存活、迁移和分化。方法 将Hoechst33258标记的NSCs植入AD模型大鼠海马，移植2、4和6 w后，行Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力，结合Hoechst33258标记和荧光免疫组化技术，分析NSCs在AD大鼠海马中的存活、迁移和分化。结果 移植的NSCs在宿主脑内能够存活至少6 w，沿海马回向两侧迁移，NSCs移植2 w后，免疫荧光检测无明显神经丝蛋白200(NF200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸(Glu)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性反应，而移植后4、6 w，则可见免疫阳性反应细胞。Y迷宫测试结果显示移植NSCs 2、4、6 w后大鼠学习、记忆能力明显得到恢复，与AD模型组比较有统计学意义（P<0.05)，与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05)。结论 自新生大鼠海马齿状回分离培养的NSCs在AD模型大鼠海马内能够存活、迁移并分化为胆碱能、谷氨酸能神经元及神经胶质细胞。
【关键词】 阿尔茨海默病；神经干细胞；移植；分化
阿尔茨海默病(AD)是中枢神经退行性疾病之一，现已成为严重威胁老年人健康的四大疾病之一。有研究表明前脑胆碱能投射系统胆碱能神经元变性、细胞数量减少,导致AD认知功能不可逆的减退〔1〕。目前药物治疗效果不理想,因此寻找有效的治疗方法已迫在眉睫，而神经干细胞(NSCs)的自我更新和多分化潜能等特性使得NSCs移植成为一个较理想的治疗策略。我们之前的研究已观察到NSCs移植到AD大鼠海马内能够存活、增殖〔2〕，但能否分化为神经元尚不清楚。因此本研究将进一步观察移植的NSCs在AD模型大鼠脑内的分化，即是否能分化为神经元，特别是胆碱能和谷氨酸（Glu)能神经元，为临床治疗AD提供新思路和可借鉴的动物实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及分组
健康雄性SD大鼠（3～4月龄,体重250～300 g)、新生SD大鼠(24 h内)，均为郑州大学医学院实验动物中心提供。取成功AD模型大鼠32只,分为AD模型组、模型后2、4、6 w移植组，另设正常对照组，每组各8只。
1.1.2 主要试剂和仪器
β淀粉样蛋白140（Aβ140)、Hoechst33258、 DAB试剂盒、神经丝蛋白200(NF200)抗体 (Sigma公司)， DMEM/F12、B27（Gibco公司)，表皮细胞生长因子（EGF)(珠海京美生物公司)，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)（北京邦定生物公司)，胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、胆碱乙酰转移酶 (ChAT)抗体、TRITC标记抗小鼠IgG、TRITC标记抗兔IgG（北京中杉公司)，Glu 抗体（武汉博士德公司)。SP试剂盒(北京中山生物技术有限公司)；Y型电迷宫（张家港生物医学仪器厂)、荧光显微镜（日本尼康E600)、大鼠立体定向仪SN2型（日本东京成茂科学器械研究所)。
1.2 方法
1.2.1 AD模型制备
Aβ140溶于无菌生理盐水(2 μg/μl)，用前37℃孵育1 w以上，使其变为聚集状态的Aβ。AD模型组及移植组大鼠经10%水合氯醛腹腔麻醉（3 ml/kg体重)，参照Paxinos大鼠图谱〔3〕，选择双侧海马CA1区为注射靶区，详见参考文献〔2〕。
1.2.2 海马NSCs的分离培养
见参考文献〔2〕。
1.2.3 海马NSCs移植
AD模型组、移植组大鼠先制备成AD模型。模型建立7 d后，收集第2代培养的NSCs用Hoechst33258 (10 μg /ml培养液)标记30 min。将细胞反复吹打使之分散，活细胞计数，离心调整细胞浓度为1×105个/μl；然后以制备AD模型同样的方法、同样的位点分别将5 μl细胞悬液注入2、4和6 w移植组大鼠海马CA1区。AD组则以同样的方法、同样的位点注入等量无菌生理盐水。正常对照组不施以任何处理。动物按照上述分组，正常对照组、AD模型组于移植2 w后分别进行行为学检测，各移植组分别于移植2、4、6 w后进行行为学检测和
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