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细胞增殖的检测及临床意义 |
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用于外科切除和内窥镜或穿刺活检获得的新鲜组织和石蜡包埋组织[8]。标本制备常用蛋白酶、化学物质或用机械法分离细胞,实体瘤的分离较困难,成功率只有60%~70%[7],要求所分离的单细胞悬液中细胞团块和碎片占全部细胞20%以下,肿瘤细胞应含20%以上。FCM短时间内可获得1×105个细胞的数据,但由于受分离技术的限制,细胞成分复杂,数据的准确性差。细胞增殖标志物用免疫酶标后均可用于免疫组织化学检测,由于标志物的理化性质不同,分别适用于冰冻或石蜡切片,该法可以在切片上直观、清晰地显示出增殖期的染色细胞,因标志物不同可以显示增殖周期的不同阶段,在光学显微镜下观察1000-2000个肿瘤细胞,计算每100个肿瘤细胞中增殖细胞所占的比例即为该标志物的标记指数(Labeling index,LI)。免疫组织化学方法虽然所用的时间长于FCM,但是所计数细胞完全是肿瘤细胞,数据准确,简单易行,敏感性及特异性较强。免疫组织化学法更适用于福尔马林固定石蜡包埋组织的回顾性研究。
3 临床应用
正常神经细胞为分化成熟细胞,使用任何方法都检测不到增殖细胞。在该系统中研究较多的是神经胶质瘤,已有资料表明PCNALI与该肿瘤的组织学分级及预后有着密切关系,随着恶性程度的增高LI也增加[8]。在脑肿瘤多种标志物的联合检测发现BrDU与PCNALI之间有平行关系,而Ki67指数与PCNA指数相关性很小。 淋巴瘤和白血病的骨髓研究较多,由于分型复杂,结论不尽相同,Giordano[9]在一组65例急性非淋巴瘤白血病骨髓穿刺前注入腔内BrDU进行活体掺入,用FCM检测了BrDU和PCNA,比较化疗前后增殖指数的变化并随访患者,经多变量分析认为细胞增殖指数是一个独立的预后指标,在白血病的治疗效果观察中有很大实用价值。PCNALI在非何杰金淋巴瘤的组织学分级中差异显著,BrDU与Ki67检测结果与组织学分级的关系和PCNA基本一致。有些患者组织学分级为低度恶性而肿瘤细胞增殖指数较高,这些患者预后较差。 正常宫颈上皮增殖细胞只存在于基底细胞层,而轻中度不典型增生和原位癌的上皮全层均见到,而浸润的癌巢中大多数是增殖细胞,该变化表明增殖检测在宫颈癌具有诊断意义,DNA-PαLI在上述病理变化中逐渐升高,表明与组织学分类有关[6]。在一项用雌激素治疗绝经后子宫内膜癌的研究中,40例没有接受激素治疗的病例组Ki67LI为24%,接受过激素治疗33例指数为10%,这项研究的结论为Ki67LI与子宫内膜癌的组织学分级和雌激素受体无明显关系,在观察激素治疗效果上有一定价值。
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