对高密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价

李清华，　杨昌国　(宁波市临床检验中心，浙江宁波　315000)
贺 娟，　戴 强　(宁波市中医院)

摘要　为评价基于化学修饰(BM法)和选择性抑制(一化法)原理的两种高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的直接测定法的精密度、准确度和特异性，将这两种方法与我国检验学会推荐的磷钨酸-镁沉淀法(PTA法)作了比较，并以超速离心分离的纯HDL和LDL组分验证了对HDL-C测定的特异性与准确性。精密度评价按照NCCLS的EP 5-T2导则文件的方案进行，对高、低两种HDL-C浓度混合血清所测定的结果表明这三种方法测定HDL-C均有良好的精密度，总CV值PTA法3.54%～4.13%，BM法1.72%～2.48%，一化法1.28%～2.49%，都可达到临床满意的程度。40份临床样品测定结果()分别为1.41±0.35 mmol/L(PTA法)，1.35±0.32 mmol/L(BM法)和1.35±0.33 mmol/L(一化法)。两种直接测定法的结果与PTA法结果的差异无统计学意义。PTA法(X)与BM法(Y)的回归方程为Y＝0.8932 X＋0.05672，相关系数r＝0.9859；PTA法(X)与一化法(Y)的回归方程为Y＝0.9194 X＋0.02439，相关系数r＝0.9866。提示对一般样品的测定，两种直接测定法的结果与PTA法有良好的相关。在混合血清中分别加入不同量的超离心HDL和LDL组分后测定的结果提示PTA法和两种直接测定法都可以得到很好的回收率，对HDL-C有很好的特异性。稀释试验的结果表明三种HDL-C测定法均有良好的线性。以化学修饰法和选择性抑制法直接测定HDL-C具有较好的精密度，对HDL-C有很好的特异性，适应自动分析，可以真实反映HDL-C的水平，值得在临床推广应用。
关键词　高密度脂蛋白胆固醇；　直接测定法

　　最近几年来已发展出三类可对HDL-C作直接测定的方法［1～4］，其中尤以基于化学修饰法［2］和选择性抑制法原理［3］的直接测定法受到临床实验室的重视和欢迎，其商品化试剂盒分别以宝林曼公司和日本第一化学株式会社的产品为代表。一般认为HDL-C直接测定法所得结果符合美国国家胆固醇教育计划(NCEP)规定的准确度与精密度要求，但尚有一些有待完善之处。我们以超速离心法分离出HDL和低密度脂蛋白(LDL)的纯组分，并以此脂蛋白组分观察了直接测定法的准确度与可靠性。
1　材料与方法
1.1　样品　40份血脂测定标本为本院的血脂门诊病人样品，早晨空腹取血，室温自行凝固后经离心分离血清，当天完成总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)测定，HDL-C的测定在4天内完成。40份样品的TC平均浓度为4.22±0.78 mmol/L(范围为2.8～6.5 mmol/L),TG的平均浓度为0.75±0.32 mmol/L(范围为0.3～1.8 mmo/L)。
1.2　混合血清　将无黄疸、无溶血、无严重脂浊的正常人空腹血清数份混合，作为基础血清，在其中加入不同比例的超速离心分离的LDL和HDL组分，观察测定的精密度和准确性。此混合血清的总胆固醇浓度为5.22 mmol/L，TG浓度为0.89 mmol/L。
1.3　仪器与试剂　所有的血脂和HDL-C的测定均在日立7060型自动分析仪上进行，所用的试剂见下面各条所述；BECKMAN L 7—80超速离心机，SW-28转头。
1.4　血脂测定方法　TC测定采用COD-PAP法，试剂为宁波慈城试剂厂产品，标准是试剂盒内所带的ALBK法定值血清，该定值可溯源至国家胆固醇纯度标准(卫生部老年医学研究所)。操作按说明书提供的参数由日立7060分析仪测定。TG测定采用GPO-POP法，试剂为宁波慈城试剂厂产品，标准是试剂盒内所带，为三油酸甘油酯的水溶液。操作按说明书提供的参数由日立7060分析仪测定。
1.5　脂蛋白组分的超速离心分离方法　新鲜的正常人混合血清以硫酸葡聚糖(DS 50)-CaCl2分步沉淀分离出非HDL和HDL组分［7］，后以序列超速离心法［8］(141 000×g，12℃，每次离心20 h)分离出d＝1.030～1.050的LDL组分和d＝1.070～1.190的HDL组分。经抗apo B抗体和抗apo AI抗体检查，LDL组分中不含有apo AI,HDL组分中不含有apo B。
1.6　HDL-C的测定方法
1.6.1　磷钨酸-镁法(PTA法)　方法原理按文献［1］，试剂盒为宁波慈城试剂厂产品，批号970728，

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