样品空白速率排除胆红素对肌酐两点法测定的负干扰

石凌波，　虞勇明，　林龙顺，　刘书霞
(广州军区广州总医院检验科,广州510010)

摘要　利用碱性试剂作样品空白速率消除黄疸血清对Jaffe 反应两点法测定肌酐的干扰。线性范围在1393 μmol／L 内;CV 2.09%～6.21%。50例黄疸样品(总胆红素Tbil 平均为153.3 μmol／L)和50例非黄疸样品(Tbil 平均＜20 μmol／L),用速率法(原法)、本法及Rate-B 法分别进行对照实验,结果表明黄疸组,本法与Rate-B 法结果一致,方法判断可接受,原法与Rate-B 法结果不一致,方法判断不可接受,而非黄疸组,无论本法还是原法都与Rate-B 法结果一致,方法判断均可接受。
关键词　肌酐Jaffe 法；　样品空白速率法；　胆红素

　　用碱性苦味酸法测定血清肌酐时,由于胆红素逐渐转化为胆绿素,对505 nm处的ΔA有负干扰甚至出现负值。我们利用半自动生化分析仪,通过增设样品空白速率,从方法学角度克服了黄疸对肌酐测定的负干扰。
1　材料和方法
1.1　试剂　自配苦味酸试剂　R1:160 mmol／L NaOH,20 mmol／L硼砂;R2:50 mmol／L苦味酸。胆红素试剂盒(重氮法):宁波亚利生物公司。
1.2　　肌酐标准液　8 840 μmol／L,上海生物制品研究所。132.6 μmol／L北京中生公司。
1.3　胆红素标准纯品(分析纯)［1］。
1.4　收集混合血清及肌酐低、中、高值黄疸和非黄疸血清各50例。
1.5　测定方法和参数　肌酐测定分别用Rate-B 法(日立7150全自动分析仪)和速率法(S500P半自动生化分析仪),后者又分原法和本法。其中原法(速率法)主要参数:温度30℃,样品50 μl,R1∶R2按5∶1混合为工作液1000 μl,波长505 nm,两点法测定,延滞时间12秒,两点读数时间12秒。本法(样品空白速率法)参数完全同原法。不同之处在于将样品与R1混合后作为样品空白按本法参数多测一次,原法与样品空白(负值)结果之差为本法结果。Rate-B法参数见文献［1］。
2　反应读数时间的选择
　　选取浓度分别为6.6、37.8、169.6 μmol／L的低、中、高胆红素标准液,用本法测定,此时样品中肌酐浓度为0,从反应一开始,每12秒记录一次吸光度,观察144秒全反应过程中吸光度的变化,共13个测光点。如附图所示。
　　结果表明,在胆红素标准液中加入R1或工作液后,在读数时间中单位时间内胆红素被氢氧化钠氧化下降的吸光度变化基本相同。由于氢氧化钠对胆红素的作用与肌酐存在与否无关,故采用试剂R1代替工作液做样品空白速率。
3　方法学评价
3.1　准确度实验　将8 840 μmol／L肌酐标准液按肌酐∶水=1∶5稀释成1 473 μmol／L标准液后,再用胆红素标准液进行倍比稀释,制成黄疸标准液,同时也选取上海生物制品研究所提供的定值质控血清,分别用原法、本法和Rate-B法测定,结果重复三次,取均值,见附表。
　　结果表明,原法受胆红素的干扰,本法接近实际值。

□曲线1∶R1与胆红素标准液6.6 μmol／L的反应曲线
■曲线2∶工作液与胆红素标准液6.6 μmol／L的反应曲线
△曲线3∶R1与胆红素标准液37.8 μmol／L的反应曲线
▲曲线4∶工作液与胆红素标准液37.8 μmol／L的反应曲线
○曲线5∶R1与胆红素标准液169.6 μmol／L的反应曲线
●曲线6∶工作液与胆红素标准液169.6 μmol／L的反应曲线
附图　低、中、高值胆红素标准液与R1或工作液反应的吸光度变化

附表　本法测定肌酐准确度实验(μmol／L)
 

　 总胆红素 肌酐 Rate-B法 原法 样品空白 本法
上生所 　2.0 132.3 127　 131.7 　＋2.7 129　
自配　 141.9 736.7 711　 511.5 －197.1 708.6
自配　 　62.7 368.3 350.3 267.9 －94.2 362.1

3.2　批内重复性　选取肌酐正常和含量接近医学决定水平高值的混合血清各一份,用本法连续重复测定20次,均值分别为114.

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