ELISA测定血清

杨波，蒲菲菲，康健，范剑非，杜晓炬，李顺明，朱善德，邢婕

(沈阳军区总医院普外科,沈阳110015)

关键词　肿瘤；　β-葡萄糖醛酸酶；　酶联免疫吸附试验
　　β-葡萄糖醛酸酶(β-Glucuronidase,β-G)存在于人体的各种组织及体液中,当机体患有癌症或发生恶变时,该酶活性增高。我们应用ELISA法对血清β-G进行检测,判断其在良恶性疾病筛选和诊断中的价值。
1　材料与方法
1.1　样品选择　肿瘤组111例,男63例,女48例,平均42.7岁。其中良性甲状腺肿16例,甲状腺癌6例,肺癌27例,胃癌25例,肝血管瘤6例,肝细胞肝癌31例。正常对照组35例,男21例,女14例,平均35.7岁。健康献血员106名,男67名,女39名,平均32.5岁。患者样品均取术前空腹静脉血。
1.2　试剂　单克隆及多克隆抗β-G抗体由美国Alabama大学K-J Ho教授惠赠,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠单克隆抗体为北京四环公司产品,其他为常规ELISA试剂。
1.3　ELISA的建立　最优条件为,多克隆抗体用pH 9.6,0.05 mol／L碳酸盐缓冲液1∶2000稀释,100 μl／孔,酶标微孔板4℃过夜,0.5%牛血清白蛋白100 μl／孔,37℃封闭2 h,用PBST洗3次,每次3 min,甩干;4℃保存。待测血清100 μl,37℃ 1 h;PBST液洗3次,加单克隆抗体(1∶100)100 μl,37℃温育1 h;PBST洗3次,加酶标单克隆抗体(1∶800)100 μl／孔,37℃温育1 h,PBST洗3次,以邻苯二胺为底物,显色15 min后用2 mol／L H2SO4终止反应。于酶标仪(BIO-RAD 3552型)490 nm测吸光度,参比波长为655 nm。按常法计算判断值(样品吸光度／阴性对照吸光度≥2为阳性)。阳性样本以倍比方式稀释至阴性时的滴度为测得值。
1.4　参考值的确定　106名健康献血员血清β-G滴度,用几何均数法计算均数及标准差,再按95%单侧可信限,求得正常上限为6.7滴度,拟定大于7为阳性。
2　结果与讨论
　　不同组别β-G测定结果比较见附表。

　　附表　肿瘤和对照组β-G测定结果比较
 

组　　别 例数 阳性例数 平均滴度±s
良性甲状腺肿 16 　2 　6.76±1.25
甲状腺癌 　6 　5 　8.71±1.58
肺　　　　癌 27 21 11.30±1.59
胃　　　　癌 25 19 10.96±1.38
肝血管瘤 　6 　0 　6.61±1.23
肝细胞肝癌 31 25 16.59±1.69
正常对照组 35 　1 　6.45±1.20

　　良性肿瘤与正常对照组比较，β-G均无显著差异，P＞0.05。恶性肿瘤与良性肿瘤及正常对照组间比较，均有显著性差异，P＜0.01。其中甲状腺良恶性病变间比较，肝脏良恶性病变间比较，β-G均有显著差异，P＜0.01。恶性肿瘤间比较，β-G以肝癌最强，与其他恶性肿瘤如肺癌、胃癌、甲状腺癌间均有显著性差异，P＜0.01。
　　β-G是人体酸性水解酶中的一种。存在于细胞的溶酶体、内质网及高尔基复合体等超微结构内［1］,具有以下功能①与类固醇激素的结合;②对结合的葡萄糖醛酸甙的水解;③参与细胞的增生［2］。其中第三项功能在肿瘤组织发生发展过程中尤为突出,当机体组织细胞发生恶变时,细胞的过度异常增生致该酶活性明显增高［3］。为此我们尝试通过测定组织及体液中β-G的活性,探索对肿瘤诊断的价值。
3　参考文献
1　杨波,朱善德,杜晓炬,等.人肝细胞超微结构β-葡萄糖醛酸酶分布的定位定量研究及意义.中华实验外科杂志,1996,13∶342
2　Finch P J,Ryan F P,Rogers K.Gastric enzymes as a screening test for gastric cancer.Gut,1987,28∶319
3　杨波,朱善德,杜晓炬,等.免疫电镜金标染色对β-G CD在肝脏良恶性病变中的表

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