的CIK及未经抗原、DC作用的CIK。调密度为1.0×109/L、5.0×108/L，2.5×108/L，分别取100 μL加入盛有SGC7901细胞及经NDV作用的SGC7901细胞的培养孔中，使效靶比为5∶1、10∶1、20∶1，各设3个复孔，并设单纯各浓度CIK为效应细胞空白对照，NDV设单独对照。每孔用RPMI1640培养液补足至300 μL。培养12 h后，每孔加入MTT液(5 g/L)20 μL，再培养4 h，吸弃上清，每孔加入DMSO 100 μL，用酶标仪于570 nm处测吸光度(A)值，计算杀伤率。杀伤率=[1-(实验孔A值-效应细胞对照孔A值)/靶细胞对照孔A值]×100%。
1.2.7 化疗药对SGC7901细胞的杀伤作用 分别将氟尿嘧啶(5FU)、顺铂(DDP)加入装有SGC7901细胞(5×107/L)的96孔板中，调终浓度为5FU 5、10、20 mg/L，DDP 1.2 μg/L，5FU与DDP合用组浓度为5FU 10 mg/L、DDP 2 mg/L,各浓度设3个复孔。未与5FU、DDP作用的SGC7901细胞设为靶细胞空白对照孔，将每孔用RPMI1640培养液补至300 μL。共设2个96孔板，置37 ℃、体积分数0.05 CO2恒温箱作用24、48 h后分别测A值(方法同前)，计算杀伤率。杀伤率=(1-实验孔A值/靶细胞孔A值)×100%。
1.3 统计学处理
实验结果以±s表示，多组间比较采用方差分析[3]。
2 结 果
2.1 DC形态学观察
自外周血分离的单个核细胞(PBMC)呈球形，表面光滑。加入rhGMCSF和rhIL4培养2 d后，细胞体积增大，部分细胞形态不规则，呈梭形、多边形。培养4 d后，见部分细胞悬浮生长，部分细胞有毛刺伸出。培养7 d后大部分细胞聚集，胞体增大，见多数细胞有毛刺伸出。
2.2 DC及CIK细胞表型分析
培养第7天DC细胞的CD86、CD83表达增加,测CD83的表达率为 78.3%, CD86为 80.4%。培养第7天CIK细胞CD16+56的表达率为43.4%。
2.3 CIK及DCCIK细胞的细胞毒活性及NDV的影响
随着效靶比增加，CIK细胞对SGC7901细胞杀伤作用增强，效靶比20∶1时杀伤作用高于效靶比5∶1时(F=2 305.32,q=166.36,P<0.01)。在同一效靶比下，DCCIK组对SGC7901细胞的杀伤率则明显高于CIK组(F=2 103.22～5 168.41,q=21.354～326.23,P<0.01)。同时，NDV本身对SGC7901细胞也有杀伤作用，杀伤率在20%左右，但杀伤能力低于CIK组。用NDV修饰SGC7901细胞抗原后，无论是CIK细胞还是DCCIK细胞对SGC7901细胞的杀伤率均增加。其中负载胃癌细胞抗原的DCCIK细胞杀伤率最高，效靶比为20∶1时，达到83.4%。见表1。 齐鲁医学杂志2010年10月第25卷第5期 Med J Qilu, October 2010, Vol.25, No.5
2.4 化疗药对SGC7901细胞的杀伤作用
5FU、DDP在一定范围内，随浓度增加对SGC7901细胞杀伤作用而增强。将二者合用时对SGC7901细胞的杀伤有协同作用，明显增加杀伤效果。随杀伤时间延长，化疗药对SGC7901细胞的杀伤作用进一步增加，化疗药作用48 h与24 h的杀伤率比较，差异有统计学意义(t=4.60～37.18，P<0.05)。但48 h时化疗药物的疗效也不如单纯CIK细胞24 h的疗效。表1 CIK细胞对SGC7901细胞的杀伤率表2 24 h及48 h化疗药杀伤率
3 讨 论
肿瘤细胞表面存在肿瘤相关抗原，但这些抗原的免疫原性大多较弱或隐含，不足以引起宿主有效的抗肿瘤免疫反应，导致免疫逃逸。免疫治疗的关键是要充分显露肿瘤抗原，使肿瘤特异性杀伤细胞能在肿瘤细胞上辨认出更多抗原靶点，从而更有效地杀灭肿瘤细胞。本研究基于以上认识，既重视了肿瘤的杀伤手段，就是诱导、培养和扩增肿瘤特异性杀伤细胞，又注意了使肿瘤细胞隐含的抗原显露出来，使两方面结合提高杀伤效果。
CIK细胞是非MHC和非TCR限制性的细胞毒淋巴细胞，由外周血单个核细胞在多种细胞因子(如IFNγ、IL1、IL2、CD3Ab等)的共同刺激下诱导而成的[4]。CIK细胞表面既有T细胞表面标
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