1 4GalT I在大鼠坐骨神经损伤后脊髓和背根神经节中的表达

    1.6　　　取材与切片   用复合麻醉剂（5 ml/kg） 腹腔麻醉经心灌注固定。取坐骨神经相应节段脊髓和背根神经节浸于 4%多聚甲醛中，外固定时间不超过6 h，20%蔗糖、30%蔗糖依次梯度脱水。OCT包埋，连续切片，切片厚度10 μm。

    1.7　　　原位杂交   组织切片43 ℃烤片过夜，DEPC 水洗，0.2 mol/L HCl、0.3%Triton X-100、0.2%甘氨酸/PBS 作用， 蛋白酶K（1 μg/m1） 37 ℃消化25 min。0.2%甘氨酸/PBS、PBS 孵育。4%多聚甲醛室温固定；PBS、乙酸酐/ 三乙醇胺孵育。酒精梯度脱水，空气干燥。42 ℃预杂交2 h。42 ℃于湿盒中杂交10~18 h（ 杂交时探针序列同Real time-PCR） 。杂交后经依次经（ 2×SSC、l×SSC、0.1×SSC） /0.1% SDS 43 ℃洗涤；Buffer Ⅰ 室温孵育10 min，Buffer Ⅱ 37 ℃孵育30 min。加入抗地高辛抗体4 ℃过夜。显微镜观察结果并拍片。实验在相同的条件下重复3 次，每次均设阴性对照。

    1.8　　　统计学方法   各实验数据均以■±s表示，采用单因素方差分析。P< 0.05示差异有统计学意义。

    2　　结果

    　　Real-time PCR结果显示β1，4-GalT I在坐骨神经夹伤（图1A）及切断1 w（图1C）脊髓中表达最高，而在背根神经节中的表达高峰出现在坐骨神经夹伤1 d（图1B）及坐骨神经切断2 d时（图1D）。

    原位杂交显示β1，4-GalT I mRNA在正常脊髓中呈低表达，在灰质中可见少量的阳性信号（图2B）；而在坐骨神经损伤1 w后脊髓中的表达明显增高（图2C），在灰质和白质均可见大量的阳性信号。正义β1，4-GalT I cRNA 探针未检测到阳性信号（图2A）。

    原位杂交显示β1，

    3   讨  论

    β1，4-GalT I是重要的合成外部N－寡糖链的糖基转移酶之一。Zhou等发现小鼠大脑在胚胎13~17天，β1，4-GalT I的表达达到最高峰，此时正为神经系统发育高峰时期，以后随脑发育过程而下降[6]。β1，4-GalT I在细胞的生理和病理情况下发挥着多种功能，例如在小鼠卵细胞的受精反应；间充质细胞和神经嵴细胞的迁移；桑椹胚后期密集过程；表皮细胞增殖；肿瘤细胞转移及神经元轴突的延伸等生理和病理过程中，β1，4-GalT I作为细胞膜黏附分子发挥重要的作用[7-9]。

    坐骨神经夹伤后神经外膜依然保持完整，有利于轴突生长及神经肌肉的接触，损伤近侧端神经纤维可沿基底膜伸长入神经远侧端或原来的靶组织[10]，从而有利于肌肉再生。相比较而言，坐骨神经切断后神经的连续性被破坏，且基底膜的完整性遭到破坏，近端的神经纤维不能准确地进入原来相匹配的远侧端神经纤维和靶组织[1１] ，导致肌肉的去神经化。有报道认为β1，4-GalT I对施万细胞的增殖是通过对细胞周期相关因子的影响来完成的[12]，本研究结果发现β1，4-GalT I在坐骨神经夹伤及切断1 w脊髓中表达最高，而在背根神经节中的表达高峰出现在坐骨神经夹伤1 d及坐骨神经切断2 d时。这种β1，4-GalT I在不同损伤背根神经节中表达高峰时期的差异可能与损伤本身的性质有关，即可能与其基膜是否完整有关，基膜的完整性遭到破

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